作者Loofah1008 (淑女在房间晒虾)
看板Biotech
标题[求救] Western有很多 non-specific 的bands
时间Mon Aug 3 13:37:02 2009
小妹非Western达人，有请高手帮忙
不知道为何，我只要是poly-anti rabbit的抗体 一律会压出此类的状况
就是一整个non-specific的band
如图
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=eleisonhsu&b=1&f=1225232433&p=0
上面那张是beta-actin，下面那张是我要压的蛋白质
我想要看到的sizes大约是在24kD
可是我看不到任何一条可以称为是有压到的专一性的band
重作很多次也一样 由於是overexpression的protein 我也没有postive的control
现在很苦恼，不知道该怎麽办，实验室很少人做，也没有可以参考的前例
我没有定量sample，不过大约是60ug
一抗是1:500 O/N
二抗1:2500 1hr 还故意用BSA做blocking
WASH 10 min*9次 完全照一般的PROPOCAL
不知道是否有人可以给点意见? 请高手救我!!>< PLEASE~
十分感激!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.123.85.86
1F：推 tsubasawolfy:个人意见是non specific都这麽强了 target protein 08/03 15:08
2F：→ tsubasawolfy:还没看到就是没有expression... 08/03 15:08
3F：→ Loofah1008:有道理，感谢楼上，了解THX 08/03 15:55
4F：→ bobbygau:应该把完整protocol写出来，比较好抓问题。如果你连actin 08/03 16:40
5F：→ bobbygau:都这麽脏，技术要再练练哦。确定抗体能用吗? 08/03 16:42
6F：→ Loofah1008:跟PAPER是用同一只~蛋白质相关技术真的很不上手ˊˋ 08/03 19:42
7F：推 soceress:有的时候用BSA blocking会比较脏..有试过脱脂奶了吗?? 08/07 11:06