作者yangkoumi (用力活著)
看板Biotech
標題[求救] 二維電泳的電流
時間Sun Aug 2 00:34:18 2009
最近在跑二維電泳
結果經過染色之後幾乎沒有點@@
而且marker的部份也跑出來怪怪的
在蛋白質定量的時候都有測出濃度
所以我想是不是跑到跳海了呢?
我跑的條件是: 200V 90mA (兩片膠)
跑5個小時(是不是電流太高呢?)
目前想說如果要重跑的話
再跑SDS的時候以Agrose 封膠的時候是不是可以在裡頭加一點dye
或是在平衡IPG strip的最後一步(Buffer II 加完) 加一點dye
以免跳海發生
因為我是使用Bio rad的系統
想請問一下有在使用的版友能不能給點建議
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.165.230.95
1F：→ eve19910:13 公分 一片最高到 25 mA 4~5小時 08/02 00:51
2F：推 chl20020933:問題可能很複雜 建議找身邊有經驗的幫你解決 08/02 01:32
3F：→ missoul:記得有建議是(26cm)每張1.5W左右 我想要注意過程變化 08/02 04:00
4F：→ missoul:通常以agarose封膠條時是有含bromophenol blue的 08/02 04:01
5F：→ missoul:我的經驗是其過程中的buffer都是含有blue的 08/02 04:02
6F：→ missoul:我主要是GE系統的經驗 但是應該大同小異 請多詳閱說明書 08/02 04:03
7F：推 muchmoa:蛋白質load多少？用啥染色？其實在agarose裡加dye就可以了 08/02 14:04
8F：→ muchmoa:我也是用BioRad，我一片膠40mA(2nd stage) 08/02 14:06
9F：推 cocoon121:可以在上面+dye你load多少?怎樣的染色?你確定你的染色 08/02 16:12
10F：→ cocoon121:前人是OK到你就不可以嗎?我也用BIORED的 我們100 ug就可 08/02 16:13
11F：→ cocoon121:看的很清楚 有聽過學姐說過 用CBB染色 有人load 500 ug 08/02 16:13
12F：→ yangkoumi:我是load 500ug 用CBB染色 這次跑兩片膠 會不會是電流太 08/02 19:02
13F：→ yangkoumi:高的關係@@ 08/02 19:03
14F：推 muchmoa:你們那沒有dye可以加嗎? 08/03 13:59
15F：→ muchmoa:真的沒有的話@@"，仔細看可以看到gel裡有1-2條分界線 08/03 14:01
16F：→ muchmoa:那大約是front的位置，我跑20x20的gel大約3-4h結束 08/03 14:02
17F：→ muchmoa:若你跑較小的話可能一半都跳海了，另外500ug Comassie是 08/03 14:03
18F：→ muchmoa:ok的，用colloidal coomassie可以看到更多 08/03 14:03
19F：→ muchmoa:不過500ug大概只能看到含量中等以上的蛋白質吧 08/03 14:05