作者yangkoumi (用力活着)
看板Biotech
标题[求救] 二维电泳的电流
时间Sun Aug 2 00:34:18 2009
最近在跑二维电泳
结果经过染色之後几乎没有点@@
而且marker的部份也跑出来怪怪的
在蛋白质定量的时候都有测出浓度
所以我想是不是跑到跳海了呢?
我跑的条件是: 200V 90mA (两片胶)
跑5个小时(是不是电流太高呢?)
目前想说如果要重跑的话
再跑SDS的时候以Agrose 封胶的时候是不是可以在里头加一点dye
或是在平衡IPG strip的最後一步(Buffer II 加完) 加一点dye
以免跳海发生
因为我是使用Bio rad的系统
想请问一下有在使用的版友能不能给点建议
谢谢
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◆ From: 118.165.230.95
1F：→ eve19910:13 公分 一片最高到 25 mA 4~5小时 08/02 00:51
2F：推 chl20020933:问题可能很复杂 建议找身边有经验的帮你解决 08/02 01:32
3F：→ missoul:记得有建议是(26cm)每张1.5W左右 我想要注意过程变化 08/02 04:00
4F：→ missoul:通常以agarose封胶条时是有含bromophenol blue的 08/02 04:01
5F：→ missoul:我的经验是其过程中的buffer都是含有blue的 08/02 04:02
6F：→ missoul:我主要是GE系统的经验 但是应该大同小异 请多详阅说明书 08/02 04:03
7F：推 muchmoa:蛋白质load多少？用啥染色？其实在agarose里加dye就可以了 08/02 14:04
8F：→ muchmoa:我也是用BioRad，我一片胶40mA(2nd stage) 08/02 14:06
9F：推 cocoon121:可以在上面+dye你load多少?怎样的染色?你确定你的染色 08/02 16:12
10F：→ cocoon121:前人是OK到你就不可以吗?我也用BIORED的 我们100 ug就可 08/02 16:13
11F：→ cocoon121:看的很清楚 有听过学姐说过 用CBB染色 有人load 500 ug 08/02 16:13
12F：→ yangkoumi:我是load 500ug 用CBB染色 这次跑两片胶 会不会是电流太 08/02 19:02
13F：→ yangkoumi:高的关系@@ 08/02 19:03
14F：推 muchmoa:你们那没有dye可以加吗? 08/03 13:59
15F：→ muchmoa:真的没有的话@@"，仔细看可以看到gel里有1-2条分界线 08/03 14:01
16F：→ muchmoa:那大约是front的位置，我跑20x20的gel大约3-4h结束 08/03 14:02
17F：→ muchmoa:若你跑较小的话可能一半都跳海了，另外500ug Comassie是 08/03 14:03
18F：→ muchmoa:ok的，用colloidal coomassie可以看到更多 08/03 14:03
19F：→ muchmoa:不过500ug大概只能看到含量中等以上的蛋白质吧 08/03 14:05