作者linwei (我會好好加油^^)
看板Biotech
標題[求救] 關於 western 的 band
時間Tue Jul 28 02:46:03 2009
想請較各位
最近在跑 cytochrome c
所以必須要抽細胞質的protein
可是發現跑出來的 band 會呈現以下情形
1.
http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668620
第一條是 GAPDH 第二條是 cytochrome c
兩個protein是同一片膠同一批sample (就是一片膠看兩個potein)
G3 跑出來的 band 很漂亮
不過 cytochrome c 卻很醜@@"
一開始原以為可能抗體太強，壓片時間太久所以導致band很粗
不過後來發現 如果只壓個10秒20秒之類的
band 一樣很粗...
但是就會像是黑黑空格沒有補滿的感覺
有點像這樣 （類似第一個 sample )
http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668633
不過是八個sample都會這樣..
這看起來又不像是抗體太強，而燒掉的白色空格
已經試很多次了還是這樣@@"
之前有學姐建議我跑高一點 % 數的膠
我有試過12% (照片是12%膠跑出來的圖)
然後也有試過15%，但是15%也是一樣的結果...
我們家的抗體是 BD ( 編號556433 )的 cytochrome c
然後我一抗都只有4度C overnight 10hr 而已
請問有經驗的各位
這有可能是什麼問題呢?
該怎麼改進呢? 謝謝大家的指教!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.229.173.66
※ 編輯: linwei 來自: 220.229.173.66 (07/28 02:48)
1F：推 tsubasawolfy:這種亮度可以把底片放上去1秒立刻拿起來了吧Orz 07/28 06:32
2F：推 bluecsky:你進暗房看你的membrane 應該可以看到螢光吧XD 07/28 08:06
3F：推 bluecsky:其實我不太懂你問題 你的問題是說 下方那一排要怎麼更 07/28 08:08
4F：→ bluecsky:漂亮嗎? 07/28 08:08
5F：推 bluecsky:假如是signal過強造成壓片不好壓 可以調整抗體濃度 07/28 08:11
6F：→ DFS:抗體再稀釋吧 1:5000 07/28 08:19
7F：→ humwang:跑膠時, 可以試試loading少一點protein 07/28 10:44
8F：推 chvkimo:我推測原po是不是在問 有band會缺角? 07/28 15:19
9F：→ linwei:嘿 我下面文章有比較詳細的圖呦~~^^ 07/28 20:21