作者linwei (我会好好加油^^)
看板Biotech
标题[求救] 关於 western 的 band
时间Tue Jul 28 02:46:03 2009
想请较各位
最近在跑 cytochrome c
所以必须要抽细胞质的protein
可是发现跑出来的 band 会呈现以下情形
1.
http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668620
第一条是 GAPDH 第二条是 cytochrome c
两个protein是同一片胶同一批sample (就是一片胶看两个potein)
G3 跑出来的 band 很漂亮
不过 cytochrome c 却很丑@@"
一开始原以为可能抗体太强，压片时间太久所以导致band很粗
不过後来发现 如果只压个10秒20秒之类的
band 一样很粗...
但是就会像是黑黑空格没有补满的感觉
有点像这样 （类似第一个 sample )
http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668633
不过是八个sample都会这样..
这看起来又不像是抗体太强，而烧掉的白色空格
已经试很多次了还是这样@@"
之前有学姐建议我跑高一点 % 数的胶
我有试过12% (照片是12%胶跑出来的图)
然後也有试过15%，但是15%也是一样的结果...
我们家的抗体是 BD ( 编号556433 )的 cytochrome c
然後我一抗都只有4度C overnight 10hr 而已
请问有经验的各位
这有可能是什麽问题呢?
该怎麽改进呢? 谢谢大家的指教!!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.229.173.66
※ 编辑: linwei 来自: 220.229.173.66 (07/28 02:48)
1F：推 tsubasawolfy:这种亮度可以把底片放上去1秒立刻拿起来了吧Orz 07/28 06:32
2F：推 bluecsky:你进暗房看你的membrane 应该可以看到萤光吧XD 07/28 08:06
3F：推 bluecsky:其实我不太懂你问题 你的问题是说 下方那一排要怎麽更 07/28 08:08
4F：→ bluecsky:漂亮吗? 07/28 08:08
5F：推 bluecsky:假如是signal过强造成压片不好压 可以调整抗体浓度 07/28 08:11
6F：→ DFS:抗体再稀释吧 1:5000 07/28 08:19
7F：→ humwang:跑胶时, 可以试试loading少一点protein 07/28 10:44
8F：推 chvkimo:我推测原po是不是在问 有band会缺角? 07/28 15:19
9F：→ linwei:嘿 我下面文章有比较详细的图呦~~^^ 07/28 20:21