作者simonmiho (simon)
看板Biotech
標題Re: [求救] GST pull down assay 問題...
時間Sun Jul 26 01:23:31 2009
※ 引述《iamrim (笨小孩~)》之銘言：
(恕刪)
: 問題:
: 1.A protein與GST only beads 4度結合2 hrs,PBS+1mM DTT+1%tritonX100 wash3次
: 2Xsample bf去煮beads.跑膠還有A protein signal.就是negtive control做不好.
PAGE or western ?
: 會不會是A protein 太小卡在bead,怎麼洗都洗不掉......>O<
有試過 A protein + beads only ?? 如果有代表
A 與 bead 有nonspecific binding.....
: 2.有換buffer的必要嗎??看別人家好像都有換.imidazole多會影響binding?
你是指 A and B binding的buffer?
如果你的 A and B binding不強..imidazole多會洗掉...
: 3.reduced Glutathion去elute跟直接煮bead有差嗎?
直接煮如果是看SDS-PAGE 有可能會比較髒....
不過western應該就比較沒差~~
: 感謝看完....我已經在GST pull down徘徊已久.....
: 希望能早日脫困~謝謝
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◆ From: 118.171.89.2
1F：推 iamrim:western.有nonspecific binding 07/26 18:31
2F：→ iamrim:binding buffer目前換成tris-HCl buffer試試看而非PBS 07/26 18:32