作者simonmiho (simon)
看板Biotech
标题Re: [求救] GST pull down assay 问题...
时间Sun Jul 26 01:23:31 2009
※ 引述《iamrim (笨小孩~)》之铭言：
(恕删)
: 问题:
: 1.A protein与GST only beads 4度结合2 hrs,PBS+1mM DTT+1%tritonX100 wash3次
: 2Xsample bf去煮beads.跑胶还有A protein signal.就是negtive control做不好.
PAGE or western ?
: 会不会是A protein 太小卡在bead,怎麽洗都洗不掉......>O<
有试过 A protein + beads only ?? 如果有代表
A 与 bead 有nonspecific binding.....
: 2.有换buffer的必要吗??看别人家好像都有换.imidazole多会影响binding?
你是指 A and B binding的buffer?
如果你的 A and B binding不强..imidazole多会洗掉...
: 3.reduced Glutathion去elute跟直接煮bead有差吗?
直接煮如果是看SDS-PAGE 有可能会比较脏....
不过western应该就比较没差~~
: 感谢看完....我已经在GST pull down徘徊已久.....
: 希望能早日脱困~谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.171.89.2
1F：推 iamrim:western.有nonspecific binding 07/26 18:31
2F：→ iamrim:binding buffer目前换成tris-HCl buffer试试看而非PBS 07/26 18:32