作者schmitt (小密特)
看板Biotech
標題Re: [求救] 冷凍切片破洞和H&E stain的ㄧ些問題
時間Fri Jul 24 00:29:30 2009
恕刪
以前上實習課用的方法 僅供參考
冷凍切片(Frozen section)
1.切片刀經常固定於切片機上，冷凍是平常保持在-10度C，一經通知有冰凍切片檢查
，立即開動使溫度降至-20度C~-30度之間。(請先冷機!!)
2.未經固定的組織，利用低溫切片的切片機可迅速製成近似石蠟的標本。
3.一收到新鮮組織，須立即由病理醫師切取適當小片，置於O.C.T的原形組織台上，
並再於組織上滴下幾滴，然後移入低溫切片機內冰凍1~2分鐘。
4.轉動堆進器，開放切片。
染色方法 1:
1.切片以 10 % Formalin 固定 30 ~ 60 秒
2.略加水洗。
3.以 Hematoxylin 染 1 ~ 2 分鐘
4.在氨水中，切片呈現藍色。
5.略加水洗。
6.Eosin 染 20 ~ 30 秒
7.脫水，80% 、 90%、100% 酒精
8.xylene --> xylene
9.封片
染色方法 2:
1.以 Toludine blue (0.5%) 染色一分鐘
2.沖水
3.封片
封片
一般封片:
準備物品: 黏著劑、蓋玻片、抹布、濾紙、xylene的染罐、竹籤
工作地點: 抽風櫃中
步驟:
1.取乾淨的濾紙鋪好
2.取蓋玻片，在其上滴適當的黏著劑。
3.從xylene 中取出 slide ，以45度角蓋上。
4.將抹片立於濾紙上，讓多餘的media流掉，並趁未乾前將氣泡以竹籤趕出
5.將多餘的黏著劑以xylene清除乾淨。
6.將slide 平放抽風櫃中，或放置37度C的溫箱中加速封回速度，但不可超過50度C
我相信原 PO 的方法是可行的，只是或許有小地方沒注意到而已。
所以補上別種方法，可以比較看看哪個地方有出路，注意一下這樣。
希望能幫到忙。
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◆ From: 219.85.130.178
1F：→ schmitt:這是開刀房用的，一般實驗室就不知道能不能用了 07/24 00:31
2F：推 killua1214:真的很感謝你的熱心>"<....我來看看 07/24 12:49
3F：→ killua1214:"水"是PBS or distill water or tap water or去離子水? 07/24 13:15
4F：→ schmitt:一般的自來水不間段的水流去洗 07/25 21:51
5F：→ ddlittleq:記得要充玻片背面 不然就掰了 07/25 22:48