作者schmitt (小密特)
看板Biotech
标题Re: [求救] 冷冻切片破洞和H&E stain的ㄧ些问题
时间Fri Jul 24 00:29:30 2009
恕删
以前上实习课用的方法 仅供参考
冷冻切片(Frozen section)
1.切片刀经常固定於切片机上，冷冻是平常保持在-10度C，一经通知有冰冻切片检查
，立即开动使温度降至-20度C~-30度之间。(请先冷机!!)
2.未经固定的组织，利用低温切片的切片机可迅速制成近似石蜡的标本。
3.一收到新鲜组织，须立即由病理医师切取适当小片，置於O.C.T的原形组织台上，
并再於组织上滴下几滴，然後移入低温切片机内冰冻1~2分钟。
4.转动堆进器，开放切片。
染色方法 1:
1.切片以 10 % Formalin 固定 30 ~ 60 秒
2.略加水洗。
3.以 Hematoxylin 染 1 ~ 2 分钟
4.在氨水中，切片呈现蓝色。
5.略加水洗。
6.Eosin 染 20 ~ 30 秒
7.脱水，80% 、 90%、100% 酒精
8.xylene --> xylene
9.封片
染色方法 2:
1.以 Toludine blue (0.5%) 染色一分钟
2.冲水
3.封片
封片
一般封片:
准备物品: 黏着剂、盖玻片、抹布、滤纸、xylene的染罐、竹签
工作地点: 抽风柜中
步骤:
1.取乾净的滤纸铺好
2.取盖玻片，在其上滴适当的黏着剂。
3.从xylene 中取出 slide ，以45度角盖上。
4.将抹片立於滤纸上，让多余的media流掉，并趁未乾前将气泡以竹签赶出
5.将多余的黏着剂以xylene清除乾净。
6.将slide 平放抽风柜中，或放置37度C的温箱中加速封回速度，但不可超过50度C
我相信原 PO 的方法是可行的，只是或许有小地方没注意到而已。
所以补上别种方法，可以比较看看哪个地方有出路，注意一下这样。
希望能帮到忙。
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◆ From: 219.85.130.178
1F：→ schmitt:这是开刀房用的，一般实验室就不知道能不能用了 07/24 00:31
2F：推 killua1214:真的很感谢你的热心>"<....我来看看 07/24 12:49
3F：→ killua1214:"水"是PBS or distill water or tap water or去离子水? 07/24 13:15
4F：→ schmitt:一般的自来水不间段的水流去洗 07/25 21:51
5F：→ ddlittleq:记得要充玻片背面 不然就掰了 07/25 22:48