作者yashi (我要天天快樂快樂)
看板Biotech
標題[求救] DNA電泳
時間Mon Jul 20 10:29:41 2009
我是把real-time PCR做完的產物拿來跑電泳
取15μL的sample加上3μl的dye
這次跑出來的sample是β-actin 大小大概是60bp
PCR跑了40個cycle
膠片是1%的agrose gel
buffer都是1× TBE buffer
我之前也是照著這個條件跑
都有跑出結果來
不過最近幾次發現sample都卡在上面下不來…
但是marker卻分得滿漂亮的
現在根本不知道問題出在哪裡
覺得很苦惱…
希望板上有高手可以幫我解決
感激不盡！！！
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448889&p=3
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◆ From: 140.112.23.86
1F：推 conective:請問PCR產物的大小？ 07/20 10:48
2F：→ yashi:60bp 07/20 11:45
3F：→ chvkimo:你的agarose是新買的嗎? 07/20 11:46
4F：→ yashi:嗯 是新買的 07/20 11:46
5F：→ chvkimo:是不是換牌子? 注意agarose有分很多種 07/20 11:47
6F：→ yashi:…真的啊…我們家有二個牌子的…我用另一個試試好了 謝謝 07/20 11:47
7F：→ yashi:我這次用的是amresco的 07/20 11:48
8F：推 chvkimo:你可以比較一下 兩罐有什麼地方不一樣..或是先前是用哪一 07/20 11:49
9F：→ chvkimo:種 07/20 11:49
10F：→ yashi:其實我一直是用amresco的哎… 07/20 11:55
11F：推 chvkimo:是喔 那可能就不是這個問題~ 07/20 13:11
12F：→ chvkimo:agarose貨號一樣的話 也許就不是這個問題 07/20 13:13
13F：推 flymon:可能要先確定有PCR出東西 或者你可以loading一個之前 07/20 16:07
14F：→ flymon:曾經可以看到的sample當作跑膠過程的positive control 07/20 16:08
15F：推 sweetE:marker不是跑的挺好的嗎 應該不是膠的問題吧 07/20 18:35
16F：→ sweetE:check看看 跑PCR的program是不是跟以前一樣 07/20 18:37
17F：→ sweetE:有時候被別人動過 自己都不知道 07/20 18:37
18F：→ NKTcell:可以試試看1.5%的跑跑看 cDNA最好不要放太久 07/20 22:42
19F：→ bobbygau:real-time PCR是SYBR Green嗎?有跑Melting curve?同一對 07/20 23:33
20F：→ bobbygau:primers?確定有產物嗎?看看之前的反應跟現在的反應有哪 07/20 23:35
21F：→ bobbygau:些地方不同也許就能釐清問題，有時候全部reagents換新也 07/20 23:37
22F：→ bobbygau:可能改善，不然就去拜拜吧。 07/20 23:38
23F：推 chvkimo:我曾經因為marker也跑的好好的 但是PCR產物全卡在well裡 07/21 02:09
24F：→ chvkimo:後來比較一下 發現agarose有點不一樣,所以我才會懷疑 07/21 02:09
25F：→ chvkimo:但是原po既然都說agarose都一樣,那就可以先排除了 07/21 02:10
26F：→ seal0413:you should have positive control in your experiment 07/21 21:06
27F：→ seal0413:Check your primers!!! 07/21 21:08
28F：推 chl20020933:上面那個是你的template DNA吧 染色背景那麼強 07/21 22:11
29F：→ chl20020933:product只有60bp gel只有1% 不可能看到東西 根本不是 07/21 22:11
30F：→ chl20020933:product卡在上面 07/21 22:12
32F：→ sneak: m 01/03 16:57