作者yashi (我要天天快乐快乐)
看板Biotech
标题[求救] DNA电泳
时间Mon Jul 20 10:29:41 2009
我是把real-time PCR做完的产物拿来跑电泳
取15μL的sample加上3μl的dye
这次跑出来的sample是β-actin 大小大概是60bp
PCR跑了40个cycle
胶片是1%的agrose gel
buffer都是1× TBE buffer
我之前也是照着这个条件跑
都有跑出结果来
不过最近几次发现sample都卡在上面下不来…
但是marker却分得满漂亮的
现在根本不知道问题出在哪里
觉得很苦恼…
希望板上有高手可以帮我解决
感激不尽！！！
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=yashihuang&b=17&f=1299448889&p=3
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.23.86
1F：推 conective:请问PCR产物的大小？ 07/20 10:48
2F：→ yashi:60bp 07/20 11:45
3F：→ chvkimo:你的agarose是新买的吗? 07/20 11:46
4F：→ yashi:嗯 是新买的 07/20 11:46
5F：→ chvkimo:是不是换牌子? 注意agarose有分很多种 07/20 11:47
6F：→ yashi:…真的啊…我们家有二个牌子的…我用另一个试试好了 谢谢 07/20 11:47
7F：→ yashi:我这次用的是amresco的 07/20 11:48
8F：推 chvkimo:你可以比较一下 两罐有什麽地方不一样..或是先前是用哪一 07/20 11:49
9F：→ chvkimo:种 07/20 11:49
10F：→ yashi:其实我一直是用amresco的哎… 07/20 11:55
11F：推 chvkimo:是喔 那可能就不是这个问题~ 07/20 13:11
12F：→ chvkimo:agarose货号一样的话 也许就不是这个问题 07/20 13:13
13F：推 flymon:可能要先确定有PCR出东西 或者你可以loading一个之前 07/20 16:07
14F：→ flymon:曾经可以看到的sample当作跑胶过程的positive control 07/20 16:08
15F：推 sweetE:marker不是跑的挺好的吗 应该不是胶的问题吧 07/20 18:35
16F：→ sweetE:check看看 跑PCR的program是不是跟以前一样 07/20 18:37
17F：→ sweetE:有时候被别人动过 自己都不知道 07/20 18:37
18F：→ NKTcell:可以试试看1.5%的跑跑看 cDNA最好不要放太久 07/20 22:42
19F：→ bobbygau:real-time PCR是SYBR Green吗?有跑Melting curve?同一对 07/20 23:33
20F：→ bobbygau:primers?确定有产物吗?看看之前的反应跟现在的反应有哪 07/20 23:35
21F：→ bobbygau:些地方不同也许就能厘清问题，有时候全部reagents换新也 07/20 23:37
22F：→ bobbygau:可能改善，不然就去拜拜吧。 07/20 23:38
23F：推 chvkimo:我曾经因为marker也跑的好好的 但是PCR产物全卡在well里 07/21 02:09
24F：→ chvkimo:後来比较一下 发现agarose有点不一样,所以我才会怀疑 07/21 02:09
25F：→ chvkimo:但是原po既然都说agarose都一样,那就可以先排除了 07/21 02:10
26F：→ seal0413:you should have positive control in your experiment 07/21 21:06
27F：→ seal0413:Check your primers!!! 07/21 21:08
28F：推 chl20020933:上面那个是你的template DNA吧 染色背景那麽强 07/21 22:11
29F：→ chl20020933:product只有60bp gel只有1% 不可能看到东西 根本不是 07/21 22:11
30F：→ chl20020933:product卡在上面 07/21 22:12
32F：→ sneak: m 01/03 16:57