作者Asialin ( )
看板Biotech
標題Re: [求救] 有人試過用agar包住細胞後，再進行石蠟 …
時間Fri Jul 17 17:09:38 2009
你好
我們自己沒有做過這樣的實驗
不過我在病理實驗室工作，常有使用者送這樣的sample
你不需要先對細胞脫水，福馬林固定之後收集起來之後一整團包到agarose gel裡面即可
再將agarose gel裁切成適當的立方體，如果你們有病理部就直接送這塊膠凍去embedding
或者你們自己要手動脫水包埋都可，這樣就不用擔心在二甲苯中細胞變透明的問題
注意不要用low-melting agarose gel
膠凍也不會在脫水包埋的過程中融化 (六七十度是沒問題的)，不需要擔心
以上
希望能幫上忙
※ 引述《rueiren (rueiren)》之銘言：
: 各位板友好：
: 小弟目前進行的實驗是將一群細胞以suspension culture的方式培養之後，該群細胞會形
: 成sphere，但由於數量不多，所以想利用切片的方式以求可以多染一些marker
: 在diabetologia, 2000, Vol.43, 907-914這篇paper裡，看到他們可以利用agarose gel
: 固定細胞之後，再進行石蠟包埋切片等等實驗
: 我也曾經試過這種方式，但是遇到一些問題：
: 1.我自己試著以酒精對細胞進行脫水，分別為70%,80%,90%,100% EtOH於37度水浴槽
: 各半小時，接下來再加入xylene之後，我就看不到pellet，根據旁人的說法，
: 細胞若遇到xylene會變透明，不知道這樣的說法是否有人有經驗ꄊ: 2.接下來要加入液狀石蠟(約60度)將xylene置換掉，但石蠟溶液本身較稠
: 故細胞應該不容易沈降到底部，不知道在這邊該如何更換
: 3.最後就是石蠟跟ararose gel的熔點問題，因為我們這邊的石蠟大約在60度左右，
: 所以擔心在這樣長的時間中泡在石蠟溶液裡，agarose gel會不會熔光光，
: 那有什麼建議可以降低細胞的lose
: 希望曾經做過類似實驗的板友，可以不吝分享您的經驗，再此先謝過了
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◆ From: 140.109.40.27
※ 編輯: Asialin 來自: 140.109.40.27 (07/17 17:10)
1F：→ vandia:聽起來挺方便的耶～下禮拜來試試看好了 07/18 00:37
2F：推 allisa:想請問一下 用跑dna電泳的agarose gel就可了嗎? 要幾%的阿? 07/19 10:35
3F：推 rueiren:真是太感謝您的回覆了，不過 不知道可否代為詢問該用哪 07/23 01:33
4F：→ rueiren:種agarose，因為我也曾先將做好的膠塊先丟到石蠟溶液裡， 07/23 01:35
5F：→ rueiren:後來發現好像會有融化的現象，才改用先脫水在包埋的方式的 07/23 01:37
6F：推 vandia:回報：固定後wash完用一般aga,1%包埋,脫水,滲蠟...結果失敗 07/23 21:07
7F：→ vandia:應該是在二甲苯的步驟出錯、因為aga沒變透明 07/23 21:07