作者Asialin ( )
看板Biotech
标题Re: [求救] 有人试过用agar包住细胞後，再进行石蜡 …
时间Fri Jul 17 17:09:38 2009
你好
我们自己没有做过这样的实验
不过我在病理实验室工作，常有使用者送这样的sample
你不需要先对细胞脱水，福马林固定之後收集起来之後一整团包到agarose gel里面即可
再将agarose gel裁切成适当的立方体，如果你们有病理部就直接送这块胶冻去embedding
或者你们自己要手动脱水包埋都可，这样就不用担心在二甲苯中细胞变透明的问题
注意不要用low-melting agarose gel
胶冻也不会在脱水包埋的过程中融化 (六七十度是没问题的)，不需要担心
以上
希望能帮上忙
※ 引述《rueiren (rueiren)》之铭言：
: 各位板友好：
: 小弟目前进行的实验是将一群细胞以suspension culture的方式培养之後，该群细胞会形
: 成sphere，但由於数量不多，所以想利用切片的方式以求可以多染一些marker
: 在diabetologia, 2000, Vol.43, 907-914这篇paper里，看到他们可以利用agarose gel
: 固定细胞之後，再进行石蜡包埋切片等等实验
: 我也曾经试过这种方式，但是遇到一些问题：
: 1.我自己试着以酒精对细胞进行脱水，分别为70%,80%,90%,100% EtOH於37度水浴槽
: 各半小时，接下来再加入xylene之後，我就看不到pellet，根据旁人的说法，
: 细胞若遇到xylene会变透明，不知道这样的说法是否有人有经验ꄊ: 2.接下来要加入液状石蜡(约60度)将xylene置换掉，但石蜡溶液本身较稠
: 故细胞应该不容易沈降到底部，不知道在这边该如何更换
: 3.最後就是石蜡跟ararose gel的熔点问题，因为我们这边的石蜡大约在60度左右，
: 所以担心在这样长的时间中泡在石蜡溶液里，agarose gel会不会熔光光，
: 那有什麽建议可以降低细胞的lose
: 希望曾经做过类似实验的板友，可以不吝分享您的经验，再此先谢过了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.27
※ 编辑: Asialin 来自: 140.109.40.27 (07/17 17:10)
1F：→ vandia:听起来挺方便的耶～下礼拜来试试看好了 07/18 00:37
2F：推 allisa:想请问一下 用跑dna电泳的agarose gel就可了吗? 要几%的阿? 07/19 10:35
3F：推 rueiren:真是太感谢您的回覆了，不过 不知道可否代为询问该用哪 07/23 01:33
4F：→ rueiren:种agarose，因为我也曾先将做好的胶块先丢到石蜡溶液里， 07/23 01:35
5F：→ rueiren:後来发现好像会有融化的现象，才改用先脱水在包埋的方式的 07/23 01:37
6F：推 vandia:回报：固定後wash完用一般aga,1%包埋,脱水,渗蜡...结果失败 07/23 21:07
7F：→ vandia:应该是在二甲苯的步骤出错、因为aga没变透明 07/23 21:07