作者LIENkt (歸蝶)
看板Biotech
標題[求救] 在Competent cell的製備過程會不會導致plasmid的遺失？
時間Fri Jul 17 01:47:55 2009
大家好，小弟想請教一個問題，
最近我想要將一個plasmid A送入DH5a E.coli中，
並且想要將這個含有plasimd A的DH5a製備成Competent cell，
這是為了將另一個plasmid B再送入這個含有plasimd A的DH5a中。
並讓plasmid A與plasmid B共同在DH5a中複製與表達。
而小弟的問題是，
第一，
當我將這個含有plasimd A的DH5a製備成Competent cell的過程中，
會不會導致plasimd A的遺失？
第二，
如果上述的plasimd A在不會遺失的情況下，
那我在製備Competent cell的bacteria culture中，
有沒有必要加入抗生素來確保plasimd A不會被丟掉？
麻煩請有這方面經驗的前輩可以幫幫忙，
謝謝。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.144
1F：推 yaliu:1.不會 2.通常活化菌隔夜時需要加，當天製作時的養菌不用加 07/17 02:28
2F：→ yaliu:不過最後挑菌的話記得A質體的抗生素要加 07/17 02:29
3F：推 hurdle:為什麼不AB一起做transformation再double selection? 07/17 02:30
4F：→ turtle24:兩個質體能相容的話一起送就ok了吧 篩選一下應該會中 07/17 02:52
5F：→ LIENkt:感謝樓上各位^_^，因為實驗需求必須以A為背景再將B送進去 07/17 05:22
6F：推 bluecsky:不太懂 以A為背景? 不是都同一種菌株嗎? 只是帶了A 07/17 08:45
7F：→ bluecsky:歐 看懂了= =...你要以A存在下當背景.. 07/17 08:46