作者LIENkt (归蝶)
看板Biotech
标题[求救] 在Competent cell的制备过程会不会导致plasmid的遗失？
时间Fri Jul 17 01:47:55 2009
大家好，小弟想请教一个问题，
最近我想要将一个plasmid A送入DH5a E.coli中，
并且想要将这个含有plasimd A的DH5a制备成Competent cell，
这是为了将另一个plasmid B再送入这个含有plasimd A的DH5a中。
并让plasmid A与plasmid B共同在DH5a中复制与表达。
而小弟的问题是，
第一，
当我将这个含有plasimd A的DH5a制备成Competent cell的过程中，
会不会导致plasimd A的遗失？
第二，
如果上述的plasimd A在不会遗失的情况下，
那我在制备Competent cell的bacteria culture中，
有没有必要加入抗生素来确保plasimd A不会被丢掉？
麻烦请有这方面经验的前辈可以帮帮忙，
谢谢。
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.144
1F：推 yaliu:1.不会 2.通常活化菌隔夜时需要加，当天制作时的养菌不用加 07/17 02:28
2F：→ yaliu:不过最後挑菌的话记得A质体的抗生素要加 07/17 02:29
3F：推 hurdle:为什麽不AB一起做transformation再double selection? 07/17 02:30
4F：→ turtle24:两个质体能相容的话一起送就ok了吧 筛选一下应该会中 07/17 02:52
5F：→ LIENkt:感谢楼上各位^_^，因为实验需求必须以A为背景再将B送进去 07/17 05:22
6F：推 bluecsky:不太懂 以A为背景? 不是都同一种菌株吗? 只是带了A 07/17 08:45
7F：→ bluecsky:欧 看懂了= =...你要以A存在下当背景.. 07/17 08:46