謝謝大家的幫助 不過我又有個問題 就是細菌裡面也有transmembrane protein 那這些蛋白質在細菌中是怎麼folding的呢 他們應該沒有ER吧 感謝之前某版友幫忙查資料 回文裡面有寫 "their N-terminal domains targeted to the ER lumen during synthesis " 希望知道的人可為小弟解惑 感激不盡! ※ 引述《YuDavid (討厭失眠)》之銘言： : 各位高手大家好 : 由於時間有點緊湊同時基礎知識又不夠紮實 : 所以來這邊請教 與此同時我也會多查點資料做功課 : 謝謝各位 : 首先 三月份開始我們老闆就叫我們表達一個叫做PepT1的protein : 這個蛋白是一個有12個transmembrane region的transporter : 由於對實驗基礎知識缺乏 : 今天才知道 原來transmembrane蛋白質沒辦法表達 囧 : 至少似乎用傳統的方法(IPTG induction)是沒有東西的@@ : 那問題來了 : 我們有個同學說 會不會是因為他是binding在膜上 : 所以你不可能把target protein給釣出來 跑PAGE當然就沒有band了 : 但是又有個同學說你在E.coli系統裡面做的蛋白未必也會乖乖binding在細胞膜上 : 而可能是疏水作用力（跨膜區域是疏水的）的關係所以translation無法順利進行 : 請問Transmembrane蛋白無法表達的問題是上述哪種 或者還有別的原因呢? : 那有沒有比較特別的方式/技術 可以把我們要的蛋白給做出來呢? : 另外 我們本來傻呼呼的想要做抗體 以後做western甚至IHC : 假設真的表達不出來 我們只表達某段exterior的部分 : 作western 應該不會有問題吧? : IHC似乎就不太可能了吧？ : 因為這個實驗的抗體要求似乎非常高　囧 : 主要的問題如上 : 感謝各位花時間閱讀並指教 --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 115.193.188.81