作者rueiren (rueiren)
看板Biotech
標題[求救] 有人試過用agar包住細胞後，再進行石蠟切片嗎？
時間Thu Jul 16 02:28:57 2009
各位板友好：
小弟目前進行的實驗是將一群細胞以suspension culture的方式培養之後，該群細胞會形
成sphere，但由於數量不多，所以想利用切片的方式以求可以多染一些marker
在diabetologia, 2000, Vol.43, 907-914這篇paper裡，看到他們可以利用agarose gel
固定細胞之後，再進行石蠟包埋切片等等實驗
我也曾經試過這種方式，但是遇到一些問題：
1.我自己試著以酒精對細胞進行脫水，分別為70%,80%,90%,100% EtOH於37度水浴槽
各半小時，接下來再加入xylene之後，我就看不到pellet，根據旁人的說法，
細胞若遇到xylene會變透明，不知道這樣的說法是否有人有經驗ꄊ
2.接下來要加入液狀石蠟(約60度)將xylene置換掉，但石蠟溶液本身較稠
故細胞應該不容易沈降到底部，不知道在這邊該如何更換
3.最後就是石蠟跟ararose gel的熔點問題，因為我們這邊的石蠟大約在60度左右，
所以擔心在這樣長的時間中泡在石蠟溶液裡，agarose gel會不會熔光光，
那有什麼建議可以降低細胞的lose
希望曾經做過類似實驗的板友，可以不吝分享您的經驗，再此先謝過了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.29.21
1F：→ bluerstars:Agarose gel的功能應該只是先讓細胞呈團狀,所以溶解應 07/16 12:37
2F：→ bluerstars:該沒有關係 07/16 12:37
3F：→ humwang:可以試試看用cryosection，我以前的同事用相同的方法 07/16 16:30
4F：→ humwang:但是她是用cryosection, 結果不錯 07/16 16:31
5F：→ rueiren:本來也有想過用冷切，但是因為冷切的染色效果較差 07/16 23:40
6F：→ rueiren:老板不愛阿，還是感謝你們的回答 07/16 23:41