作者rueiren (rueiren)
看板Biotech
标题[求救] 有人试过用agar包住细胞後，再进行石蜡切片吗？
时间Thu Jul 16 02:28:57 2009
各位板友好：
小弟目前进行的实验是将一群细胞以suspension culture的方式培养之後，该群细胞会形
成sphere，但由於数量不多，所以想利用切片的方式以求可以多染一些marker
在diabetologia, 2000, Vol.43, 907-914这篇paper里，看到他们可以利用agarose gel
固定细胞之後，再进行石蜡包埋切片等等实验
我也曾经试过这种方式，但是遇到一些问题：
1.我自己试着以酒精对细胞进行脱水，分别为70%,80%,90%,100% EtOH於37度水浴槽
各半小时，接下来再加入xylene之後，我就看不到pellet，根据旁人的说法，
细胞若遇到xylene会变透明，不知道这样的说法是否有人有经验ꄊ
2.接下来要加入液状石蜡(约60度)将xylene置换掉，但石蜡溶液本身较稠
故细胞应该不容易沈降到底部，不知道在这边该如何更换
3.最後就是石蜡跟ararose gel的熔点问题，因为我们这边的石蜡大约在60度左右，
所以担心在这样长的时间中泡在石蜡溶液里，agarose gel会不会熔光光，
那有什麽建议可以降低细胞的lose
希望曾经做过类似实验的板友，可以不吝分享您的经验，再此先谢过了
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.29.21
1F：→ bluerstars:Agarose gel的功能应该只是先让细胞呈团状,所以溶解应 07/16 12:37
2F：→ bluerstars:该没有关系 07/16 12:37
3F：→ humwang:可以试试看用cryosection，我以前的同事用相同的方法 07/16 16:30
4F：→ humwang:但是她是用cryosection, 结果不错 07/16 16:31
5F：→ rueiren:本来也有想过用冷切，但是因为冷切的染色效果较差 07/16 23:40
6F：→ rueiren:老板不爱阿，还是感谢你们的回答 07/16 23:41