作者YuDavid (討厭失眠)
看板Biotech
標題[求救] 關於表達蛋白以及製作相應抗體的問題
時間Tue Jul 14 17:00:08 2009
各位高手大家好
由於時間有點緊湊同時基礎知識又不夠紮實
所以來這邊請教 與此同時我也會多查點資料做功課
謝謝各位
首先 三月份開始我們老闆就叫我們表達一個叫做PepT1的protein
這個蛋白是一個有12個transmembrane region的transporter
由於對實驗基礎知識缺乏
今天才知道 原來transmembrane蛋白質沒辦法表達 囧
至少似乎用傳統的方法(IPTG induction)是沒有東西的@@
那問題來了
我們有個同學說 會不會是因為他是binding在膜上
所以你不可能把target protein給釣出來 跑PAGE當然就沒有band了
但是又有個同學說你在E.coli系統裡面做的蛋白未必也會乖乖binding在細胞膜上
而可能是疏水作用力（跨膜區域是疏水的）的關係所以translation無法順利進行
請問Transmembrane蛋白無法表達的問題是上述哪種 或者還有別的原因呢?
那有沒有比較特別的方式/技術 可以把我們要的蛋白給做出來呢?
另外 我們本來傻呼呼的想要做抗體 以後做western甚至IHC
假設真的表達不出來 我們只表達某段exterior的部分
作western 應該不會有問題吧?
IHC似乎就不太可能了吧？
因為這個實驗的抗體要求似乎非常高 囧
主要的問題如上
感謝各位花時間閱讀並指教
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 115.192.191.202
1F：→ YuDavid:我可憐的同組同學就這樣做了三個多月的實驗>< 07/14 17:02
2F：推 leoblack:天啊~transmembrane不是需要有ER系統才能好好地folding ? 07/14 18:01
3F：→ leoblack:個人以為啦~如果有錯請指正 07/14 18:01
5F：→ leoblack:"their N-terminal domains targeted to the ER lumen 07/14 18:04
6F：→ leoblack:during synthesis" 07/14 18:04
7F：推 bluecsky:只表達部份也要考慮是否是signal peptide的部份.. 07/14 19:18
8F：→ bluecsky:也可能一樣會被送出來...transmembrane protein超難做的 07/14 19:18
9F：→ turtle24:上網找應該買得到現成的 (與花費人力產生相比應該算便宜? 07/14 19:58
11F：→ chvkimo:你們要的 07/15 16:47
12F：→ YuDavid:感謝樓上各位的指教及資料,非常有幫助!!接下來就是要說服 07/16 01:47
13F：→ YuDavid:老闆買抗體了... 07/16 01:48