作者YuDavid (讨厌失眠)
看板Biotech
标题[求救] 关於表达蛋白以及制作相应抗体的问题
时间Tue Jul 14 17:00:08 2009
各位高手大家好
由於时间有点紧凑同时基础知识又不够紮实
所以来这边请教 与此同时我也会多查点资料做功课
谢谢各位
首先 三月份开始我们老板就叫我们表达一个叫做PepT1的protein
这个蛋白是一个有12个transmembrane region的transporter
由於对实验基础知识缺乏
今天才知道 原来transmembrane蛋白质没办法表达 囧
至少似乎用传统的方法(IPTG induction)是没有东西的@@
那问题来了
我们有个同学说 会不会是因为他是binding在膜上
所以你不可能把target protein给钓出来 跑PAGE当然就没有band了
但是又有个同学说你在E.coli系统里面做的蛋白未必也会乖乖binding在细胞膜上
而可能是疏水作用力（跨膜区域是疏水的）的关系所以translation无法顺利进行
请问Transmembrane蛋白无法表达的问题是上述哪种 或者还有别的原因呢?
那有没有比较特别的方式/技术 可以把我们要的蛋白给做出来呢?
另外 我们本来傻呼呼的想要做抗体 以後做western甚至IHC
假设真的表达不出来 我们只表达某段exterior的部分
作western 应该不会有问题吧?
IHC似乎就不太可能了吧？
因为这个实验的抗体要求似乎非常高 囧
主要的问题如上
感谢各位花时间阅读并指教
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 115.192.191.202
1F：→ YuDavid:我可怜的同组同学就这样做了三个多月的实验>< 07/14 17:02
2F：推 leoblack:天啊~transmembrane不是需要有ER系统才能好好地folding ? 07/14 18:01
3F：→ leoblack:个人以为啦~如果有错请指正 07/14 18:01
5F：→ leoblack:"their N-terminal domains targeted to the ER lumen 07/14 18:04
6F：→ leoblack:during synthesis" 07/14 18:04
7F：推 bluecsky:只表达部份也要考虑是否是signal peptide的部份.. 07/14 19:18
8F：→ bluecsky:也可能一样会被送出来...transmembrane protein超难做的 07/14 19:18
9F：→ turtle24:上网找应该买得到现成的 (与花费人力产生相比应该算便宜? 07/14 19:58
11F：→ chvkimo:你们要的 07/15 16:47
12F：→ YuDavid:感谢楼上各位的指教及资料,非常有帮助!!接下来就是要说服 07/16 01:47
13F：→ YuDavid:老板买抗体了... 07/16 01:48