作者lydiayeh (蚊子)
看板Biotech
標題[求救] 抽RNA後的風乾如何做的?
時間Sun Jul 12 18:26:07 2009
我又來啦~~
想請問大家關於抽RNA的問題
我是用TRIzol抽total RNA
在最後面我用75%酒精洗過後 用tip去除液體
就打開蓋子放在laminar flow裡面吹15分鐘
但是測量OD值吼似乎都偏低
細胞數用的很多 RNA量應該不會只有這樣ˊˋ
沉澱後的pellet也很大坨 但是值卻很低...不知道是什麼問題
想問問大家在最後的風乾動作是怎麼做的呢??
我有同學是包在塑膠袋裡面放烘箱 但因為是公用的烘箱常常沒有位置...
不知道有沒有更好的方法呢??
拜託了<(_ _)>
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◆ From: 220.129.153.236
1F：推 yangkoumi:加完DEPC水後 置入溫水浴槽(50度) 5分鐘幫助沉澱溶解 07/12 19:10
2F：推 cecik:我們是會回溶O/N 07/12 19:12
3F：推 DJHINN:我覺得 是你前面的步驟問題耶~ 07/12 20:14
4F：→ DJHINN:你要不要把你的實驗步驟全寫出來看看~ 07/12 20:15
5F：→ DJHINN:還有 我通常不用tip去吸取殘留液體 我都是用一張衛生紙 07/12 20:16
6F：推 bicon:我也覺得是之前步驟出問題，在分層抽取的步驟損失太多? 07/12 20:16
7F：→ DJHINN:鋪著 然後盡量把它倒乾(毛細現象) 而且 酒精不能全乾 07/12 20:17
8F：→ bicon:剛又看到你說pellet很大，去酒精時有被你吸掉嗎? 07/12 20:17
9F：→ DJHINN:如果酒精全乾的話 不好回溶喔 我記得 protocol上有說~ 07/12 20:18
10F：→ bicon:還是你沒溶好，我都放4度C overnight 07/12 20:18
11F：→ jazzdevil:我是抽風櫃內15分左右 之後加DEPC水後放冰上個30分鐘 07/12 21:26
12F：推 lchd:你是用多少細胞抽RNA 多少DEPC去溶？ 有跑過gel check嗎？ 07/12 21:45
13F：→ sunearth:用tip吸的話最後剩個30~50ul，用 flow抽氣吹乾，也不可以 07/12 22:40
14F：→ sunearth:也不可以全乾，不然很難回溶。確定pellet都有回溶！！！ 07/12 22:41
15F：推 f9361046:我都是倒扣在bench上放個三鐘回溶 你會不會回溶水太多?P 07/12 23:03
我都用25T滿滿的細胞下去抽，用酒精洗後白色的沉澱物蠻大坨的
回溶用20ul滅菌水，轉低速votex @@ 大概是這裡出錯嘛?
※ 編輯: lydiayeh 來自: 220.129.143.186 (07/13 07:37)
16F：推 duest:滅菌水?應該是DEPC水吧 會不會根本就RNA被吃掉了 07/13 14:47
17F：→ puec2:15分鐘太乾了，我都是用tip把水珠吸乾淨室溫放五分鐘就回溶 07/13 20:37
18F：推 chvkimo:我的作法也跟 puec2大類似 但是我大概吸完 室溫dry個2-3分 07/14 02:04
19F：→ chvkimo:鐘就乾了 就趕緊加水回溶 07/14 02:04
20F：→ bonemarrow:那如果已經幾乎乾掉了怎麼辦?? 07/14 02:11
21F：→ jodelle:憶體可以用倒的基本上他不會掉下來 在倒放在架子上風乾 07/22 23:32
22F：→ jodelle:值很低有多低啊???total RNA 1.7以上就不錯了 07/22 23:32
23F：→ jodelle:如果太乾會因為pellet溶不掉而讓值整個變很低喔!!!! 07/22 23:33