作者lydiayeh (蚊子)
看板Biotech
标题[求救] 抽RNA後的风乾如何做的?
时间Sun Jul 12 18:26:07 2009
我又来啦~~
想请问大家关於抽RNA的问题
我是用TRIzol抽total RNA
在最後面我用75%酒精洗过後 用tip去除液体
就打开盖子放在laminar flow里面吹15分钟
但是测量OD值吼似乎都偏低
细胞数用的很多 RNA量应该不会只有这样ˊˋ
沉淀後的pellet也很大坨 但是值却很低...不知道是什麽问题
想问问大家在最後的风乾动作是怎麽做的呢??
我有同学是包在塑胶袋里面放烘箱 但因为是公用的烘箱常常没有位置...
不知道有没有更好的方法呢??
拜托了<(_ _)>
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.129.153.236
1F：推 yangkoumi:加完DEPC水後 置入温水浴槽(50度) 5分钟帮助沉淀溶解 07/12 19:10
2F：推 cecik:我们是会回溶O/N 07/12 19:12
3F：推 DJHINN:我觉得 是你前面的步骤问题耶~ 07/12 20:14
4F：→ DJHINN:你要不要把你的实验步骤全写出来看看~ 07/12 20:15
5F：→ DJHINN:还有 我通常不用tip去吸取残留液体 我都是用一张卫生纸 07/12 20:16
6F：推 bicon:我也觉得是之前步骤出问题，在分层抽取的步骤损失太多? 07/12 20:16
7F：→ DJHINN:铺着 然後尽量把它倒乾(毛细现象) 而且 酒精不能全乾 07/12 20:17
8F：→ bicon:刚又看到你说pellet很大，去酒精时有被你吸掉吗? 07/12 20:17
9F：→ DJHINN:如果酒精全乾的话 不好回溶喔 我记得 protocol上有说~ 07/12 20:18
10F：→ bicon:还是你没溶好，我都放4度C overnight 07/12 20:18
11F：→ jazzdevil:我是抽风柜内15分左右 之後加DEPC水後放冰上个30分钟 07/12 21:26
12F：推 lchd:你是用多少细胞抽RNA 多少DEPC去溶？ 有跑过gel check吗？ 07/12 21:45
13F：→ sunearth:用tip吸的话最後剩个30~50ul，用 flow抽气吹乾，也不可以 07/12 22:40
14F：→ sunearth:也不可以全乾，不然很难回溶。确定pellet都有回溶！！！ 07/12 22:41
15F：推 f9361046:我都是倒扣在bench上放个三钟回溶 你会不会回溶水太多?P 07/12 23:03
我都用25T满满的细胞下去抽，用酒精洗後白色的沉淀物蛮大坨的
回溶用20ul灭菌水，转低速votex @@ 大概是这里出错嘛?
※ 编辑: lydiayeh 来自: 220.129.143.186 (07/13 07:37)
16F：推 duest:灭菌水?应该是DEPC水吧 会不会根本就RNA被吃掉了 07/13 14:47
17F：→ puec2:15分钟太乾了，我都是用tip把水珠吸乾净室温放五分钟就回溶 07/13 20:37
18F：推 chvkimo:我的作法也跟 puec2大类似 但是我大概吸完 室温dry个2-3分 07/14 02:04
19F：→ chvkimo:钟就乾了 就赶紧加水回溶 07/14 02:04
20F：→ bonemarrow:那如果已经几乎乾掉了怎麽办?? 07/14 02:11
21F：→ jodelle:忆体可以用倒的基本上他不会掉下来 在倒放在架子上风乾 07/22 23:32
22F：→ jodelle:值很低有多低啊???total RNA 1.7以上就不错了 07/22 23:32
23F：→ jodelle:如果太乾会因为pellet溶不掉而让值整个变很低喔!!!! 07/22 23:33