作者LIAR (墮天使)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請問貼不緊的神經細胞要怎麼免疫染色？
時間Tue Jul 7 00:45:24 2009
: → LIAR:請問是哪個步驟離心？ 06/28 21:35
: 推 tsubasawolfy:fix之前 06/28 22:24
: → LIAR:可是我固定前有看顯微鏡，那時還是貼的啊，這樣離心還有用嗎? 06/28 22:28
: 推 supray:操作時well會乾掉嗎? PBS吸走要馬上補 06/30 22:37
: → supray:乾掉了 鹽析出 細胞就飄了 06/30 22:38
: → supray:正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了 06/30 22:40
: 推 REIDO:請問t大，1200g會不會太大啊？ 07/04 12:30
我星期六先離心1200g 5min，之後就用平常的protocol，結果到blocking完去看
顯微鏡，之前會跑掉的cell現在竟然大部分都還乖乖在那裡，一整個爽到爆。
問題是我一抗over day，星期一要PBS前再看顯微鏡，原本貼不緊的還是跑起來了，
看來離心的效果不是長期的。請問還有別的方法可以解決這種貼不緊的問題嗎？
該不會要室溫從頭做到尾，而且每個步驟都離心一次吧？還是說一開始固定前就
離快一點或離久一點？
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.22.47
1F：推 tsubasawolfy:書上只寫了一次離心後fix 而且理論上fix的目的之一 07/07 00:52
2F：→ tsubasawolfy:也是要把細胞黏在slide上...是有寫到formaldehyde 07/07 00:54
3F：→ tsubasawolfy:fix的缺點是在水溶液中太久後那些crosslink會脫離 07/07 00:54
4F：推 tsubasawolfy:看要不要再加個-20度MeOH 5-10分鐘去precipitate 07/07 01:00
5F：→ tsubasawolfy:假如用到MeOH的話就不用再加triton或NP40去打洞了 07/07 01:02
6F：→ LIAR:MeOH是讓protein沉墊到骨架上嗎？這樣cell應該還是會掉吧？ 07/07 23:45
7F：→ LIAR:目前我知道的固定有paraformaldehyde,MeOH,EtOH,aceton等等 07/07 23:52
8F：→ LIAR:不過實用上要依據什選還是不懂，唯一有印象的好像是膜蛋白 07/07 23:57
9F：→ LIAR:不能用MeOH，會溶掉膜的樣子..... 07/07 23:57
10F：→ LIAR:不過我最需要的應該還是能讓細胞不會跑掉的固定就是了XD 07/07 23:58