作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问贴不紧的神经细胞要怎麽免疫染色？
时间Tue Jul 7 00:45:24 2009
: → LIAR:请问是哪个步骤离心？ 06/28 21:35
: 推 tsubasawolfy:fix之前 06/28 22:24
: → LIAR:可是我固定前有看显微镜，那时还是贴的啊，这样离心还有用吗? 06/28 22:28
: 推 supray:操作时well会乾掉吗? PBS吸走要马上补 06/30 22:37
: → supray:乾掉了 盐析出 细胞就飘了 06/30 22:38
: → supray:正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了 06/30 22:40
: 推 REIDO:请问t大，1200g会不会太大啊？ 07/04 12:30
我星期六先离心1200g 5min，之後就用平常的protocol，结果到blocking完去看
显微镜，之前会跑掉的cell现在竟然大部分都还乖乖在那里，一整个爽到爆。
问题是我一抗over day，星期一要PBS前再看显微镜，原本贴不紧的还是跑起来了，
看来离心的效果不是长期的。请问还有别的方法可以解决这种贴不紧的问题吗？
该不会要室温从头做到尾，而且每个步骤都离心一次吧？还是说一开始固定前就
离快一点或离久一点？
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太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头，
这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。
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◆ From: 123.192.22.47
1F：推 tsubasawolfy:书上只写了一次离心後fix 而且理论上fix的目的之一 07/07 00:52
2F：→ tsubasawolfy:也是要把细胞黏在slide上...是有写到formaldehyde 07/07 00:54
3F：→ tsubasawolfy:fix的缺点是在水溶液中太久後那些crosslink会脱离 07/07 00:54
4F：推 tsubasawolfy:看要不要再加个-20度MeOH 5-10分钟去precipitate 07/07 01:00
5F：→ tsubasawolfy:假如用到MeOH的话就不用再加triton或NP40去打洞了 07/07 01:02
6F：→ LIAR:MeOH是让protein沉垫到骨架上吗？这样cell应该还是会掉吧？ 07/07 23:45
7F：→ LIAR:目前我知道的固定有paraformaldehyde,MeOH,EtOH,aceton等等 07/07 23:52
8F：→ LIAR:不过实用上要依据什选还是不懂，唯一有印象的好像是膜蛋白 07/07 23:57
9F：→ LIAR:不能用MeOH，会溶掉膜的样子..... 07/07 23:57
10F：→ LIAR:不过我最需要的应该还是能让细胞不会跑掉的固定就是了XD 07/07 23:58