作者soceress (贏了世界又如何)
看板Biotech
標題[討論] Western blot同批sample跑出來結果不同的原因
時間Fri Jul 3 19:00:23 2009
同事問我,為什麼同一批sample,同樣的條件與實驗流程
做出來趨勢為什麼在兩次WB的結果趨勢會不太一樣??
比方說做第一次是 (一次做兩片,兩片趨勢一樣)
1 3 4 4 2 2 3 (數字表示band的強弱排序)
第二次是
1 2 4 2 4 2 2
慘一點就是同個tank裡兩片的趨勢就不同了...
整個實驗流程都沒有遇到任何問題,band的形狀,background也再美不過...
就是趨勢不穩
不知道這樣講大家有沒有看懂我描述的??
我是跟他說,可能是在呈色時的反應不均...
他的呈色方式是 ECL反應1min後
用兩片濾紙吸乾,放到夾鍊袋裡去拍冷光..
因為ECL已經被吸乾,所以不管曝光多久,亮度都不會變 (當然太短拍不到)
拍5min跟10min都一樣,只是10min顆粒比較細
不知道是否還有其它原因??
請大家賜教一下~~謝謝~
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◆ From: 192.192.93.160
1F：推 luhs:我覺得跟protein定量關係比較大 07/04 01:55
2F：→ soceress:嗯..他的同一批就定量一次,配成同濃度一大管,跑個2~3重覆 07/04 10:27
3F：→ tsubasawolfy:配成一大管取之前記得搖均勻(切身經驗.... 07/04 12:30
4F：→ soceress:嗯,他說他都有vortex再spin down 07/04 18:48
5F：推 LIAR:我比較想知道是差多少....western畢竟只有半定量，差距太小 07/05 23:11
6F：→ LIAR:的話實在不可信..... 07/05 23:12