作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] western blot 全黑
時間Fri Jul 3 02:08:50 2009
※ 引述《boblu (六百)》之銘言：
: ※ 引述《Mrbrowncafe (嬰兒)》之銘言：
: : 小弟的個人經驗是 這種情況 通常是"抗體"本身的問題
: 一抗品質不良而造成整片 membrne 全黑
: 我個人認為可能性真的不高
: 因為那表示該一抗 bind 到了你用來 blocking 的 protein 一抗作成這樣拿來賣 有點扯
: 不過 要注意的是有些一抗確實是會抓到牛奶 所以要用 normal serium 來 block
看推文好像 Santa Cruz 真的常常碰到這種狀況？
我個人是只用過兩三支 Santa Cruz 的抗體 大致都還堪用
可能只是我運氣好吧
倒是很好奇 就就免疫染色的原理來說
抗體濃度 反映時間 blocking protein 的選用 這類反映條件最佳化的問題不論
到底一抗要怎樣怎樣的特性 才能讓黏到整張 membrane 上都是啊？
現在想到的可能是 該一抗會辨識到 membrane 本身？？
且親和性遠高於隨便的蛋白質跟 membrane 的隨便結合
解決方法... 用 block 過的空白 membrane 去 preabsorpsion?
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◆ From: 131.212.202.174
1F：→ blence:我覺得Santa每支都寫1:100~1000,加上有的偵測敏感度不高,因 07/03 05:52
2F：→ blence:此整片發黑是過渡曝光的結果,調整到適當濃度應該就不會 07/03 05:54