作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] western blot 全黑
时间Fri Jul 3 02:08:50 2009
※ 引述《boblu (六百)》之铭言：
: ※ 引述《Mrbrowncafe (婴儿)》之铭言：
: : 小弟的个人经验是 这种情况 通常是"抗体"本身的问题
: 一抗品质不良而造成整片 membrne 全黑
: 我个人认为可能性真的不高
: 因为那表示该一抗 bind 到了你用来 blocking 的 protein 一抗作成这样拿来卖 有点扯
: 不过 要注意的是有些一抗确实是会抓到牛奶 所以要用 normal serium 来 block
看推文好像 Santa Cruz 真的常常碰到这种状况？
我个人是只用过两三支 Santa Cruz 的抗体 大致都还堪用
可能只是我运气好吧
倒是很好奇 就就免疫染色的原理来说
抗体浓度 反映时间 blocking protein 的选用 这类反映条件最佳化的问题不论
到底一抗要怎样怎样的特性 才能让黏到整张 membrane 上都是啊？
现在想到的可能是 该一抗会辨识到 membrane 本身？？
且亲和性远高於随便的蛋白质跟 membrane 的随便结合
解决方法... 用 block 过的空白 membrane 去 preabsorpsion?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 131.212.202.174
1F：→ blence:我觉得Santa每支都写1:100~1000,加上有的侦测敏感度不高,因 07/03 05:52
2F：→ blence:此整片发黑是过渡曝光的结果,调整到适当浓度应该就不会 07/03 05:54