作者linwei (我會好好加油^^)
看板Biotech
標題[求救] western blot 全黑
時間Mon Jun 29 20:32:21 2009
請益各位
因為我第一次遇到這種情況@@
我壓的protein 是 cleaved caspase 3
使用的抗體是 cell signaling 編號9661 的抗體
今天我做實驗
壓出來一整片都是黑的
結果關燈發現整片menbrane都發亮
我很確定我二抗沒有給錯啦@@ 且也有很努力的wash乾淨
因為抗體是跟別人要的
且我同學他也沒有做過這個protein @@
有人跟我說 如果是 Polyclonal antibodies 的
他的專一性也會比較差
會是這個原因嗎?
該怎麼改善呢?
希望有做過的版友可以提供我一點意見
好讓我下次再試的時候知道該怎麼改進@@
感恩感謝～！！！！！
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.93.11
1F：→ turtle24:可以先從降低抗體濃度試試 此外有時是抗體品質的問題 06/29 21:25
2F：推 alaric:抗體re-use, 再dilute, 另外, 可以等signal降低些再壓片. 06/30 00:09
3F：→ alaric:如果有螢光照相系統, 就直接scan, 減少expose. 06/30 00:11
4F：推 liouoiu:二抗在稀釋一點 試看看囉 06/30 03:24
5F：推 leoblack:有blocking吧?!抗體的稀釋比例用多少呢?! 06/30 10:40
6F：推 luhs:應該是一抗的問題 07/02 21:50