作者linwei (我会好好加油^^)
看板Biotech
标题[求救] western blot 全黑
时间Mon Jun 29 20:32:21 2009
请益各位
因为我第一次遇到这种情况@@
我压的protein 是 cleaved caspase 3
使用的抗体是 cell signaling 编号9661 的抗体
今天我做实验
压出来一整片都是黑的
结果关灯发现整片menbrane都发亮
我很确定我二抗没有给错啦@@ 且也有很努力的wash乾净
因为抗体是跟别人要的
且我同学他也没有做过这个protein @@
有人跟我说 如果是 Polyclonal antibodies 的
他的专一性也会比较差
会是这个原因吗?
该怎麽改善呢?
希望有做过的版友可以提供我一点意见
好让我下次再试的时候知道该怎麽改进@@
感恩感谢～！！！！！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.93.11
1F：→ turtle24:可以先从降低抗体浓度试试 此外有时是抗体品质的问题 06/29 21:25
2F：推 alaric:抗体re-use, 再dilute, 另外, 可以等signal降低些再压片. 06/30 00:09
3F：→ alaric:如果有萤光照相系统, 就直接scan, 减少expose. 06/30 00:11
4F：推 liouoiu:二抗在稀释一点 试看看罗 06/30 03:24
5F：推 leoblack:有blocking吧?!抗体的稀释比例用多少呢?! 06/30 10:40
6F：推 luhs:应该是一抗的问题 07/02 21:50