作者LIAR (墮天使)
看板Biotech
標題[求救] 請問貼不緊的神經細胞要怎麼免疫染色？
時間Sun Jun 28 20:19:13 2009
我做的是不同材料對小腦神經的培養，老師想看在某些貼不緊的情況下，
免疫染色的分部。
問題是，我只要把paraformaldehyde和triton一加下去，幾乎細胞就都浮起來了，
會看到細胞的地方只剩well的邊邊，或是整個溶液表面(也就是浮起來了)。
不過這兩個地方的型態或多或少會不太一樣，像是無法維持張力的感覺。
我用48well，步驟如下：
4% paraformaldehyd 150ul 20min
0.1% triton 150ul 20min
PBS 200ul 20min
2% BSA 200ul 1h
我特地減少PBS的次數，而且抽和加入時都用200 ul tip很緩慢的處理，但會浮起來的
還是浮起來了。請問我應該怎麼解決浮起來的問題呢？
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.22.47
1F：→ blence:你的PBS應該是沒有Ca2+跟Mg2+的吧，改用medium或HBSS？ 06/28 20:28
2F：→ LIAR:是的，我沒有Ca和Mg，但都死掉了為什麼會有影響呢？ 06/28 20:49
3F：推 tsubasawolfy:要不要用fix suspension cell的方法XD 06/28 20:52
4F：→ LIAR:願聞其詳，不過我那是原本就貼著的neuron喔！ 06/28 21:19
5F：推 tsubasawolfy:suspension有兩種 一個是要用特殊離心機 一個是poly 06/28 21:27
6F：→ tsubasawolfy:L-Glysine去吸附細胞 既然你的已經在48well裏面 06/28 21:28
7F：→ tsubasawolfy:可以離心看看 06/28 21:28
8F：→ tsubasawolfy:特殊離心機是cytocentrifuge離1200g 5-10min 06/28 21:30
9F：→ tsubasawolfy:6.24.48.96well的plate好一點的離心機都有支援 06/28 21:31
10F：→ LIAR:請問是哪個步驟離心？ 06/28 21:35
11F：推 tsubasawolfy:fix之前 06/28 22:24
12F：→ LIAR:可是我固定前有看顯微鏡，那時還是貼的啊，這樣離心還有用嗎? 06/28 22:28
13F：推 supray:操作時well會乾掉嗎? PBS吸走要馬上補 06/30 22:37
14F：→ supray:乾掉了 鹽析出 細胞就飄了 06/30 22:38
15F：→ supray:正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了 06/30 22:40
16F：推 REIDO:請問t大，1200g會不會太大啊？ 07/04 12:30
17F：→ LIAR:我用過離心了，雖然剛離完細胞有點不太一樣，但blocking時看 07/05 22:51
18F：→ LIAR:就OK了，還有大部分留著，感謝各位的幫忙。 07/05 22:52