作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题[求救] 请问贴不紧的神经细胞要怎麽免疫染色？
时间Sun Jun 28 20:19:13 2009
我做的是不同材料对小脑神经的培养，老师想看在某些贴不紧的情况下，
免疫染色的分部。
问题是，我只要把paraformaldehyde和triton一加下去，几乎细胞就都浮起来了，
会看到细胞的地方只剩well的边边，或是整个溶液表面(也就是浮起来了)。
不过这两个地方的型态或多或少会不太一样，像是无法维持张力的感觉。
我用48well，步骤如下：
4% paraformaldehyd 150ul 20min
0.1% triton 150ul 20min
PBS 200ul 20min
2% BSA 200ul 1h
我特地减少PBS的次数，而且抽和加入时都用200 ul tip很缓慢的处理，但会浮起来的
还是浮起来了。请问我应该怎麽解决浮起来的问题呢？
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太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头，
这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.192.22.47
1F：→ blence:你的PBS应该是没有Ca2+跟Mg2+的吧，改用medium或HBSS？ 06/28 20:28
2F：→ LIAR:是的，我没有Ca和Mg，但都死掉了为什麽会有影响呢？ 06/28 20:49
3F：推 tsubasawolfy:要不要用fix suspension cell的方法XD 06/28 20:52
4F：→ LIAR:愿闻其详，不过我那是原本就贴着的neuron喔！ 06/28 21:19
5F：推 tsubasawolfy:suspension有两种 一个是要用特殊离心机 一个是poly 06/28 21:27
6F：→ tsubasawolfy:L-Glysine去吸附细胞 既然你的已经在48well里面 06/28 21:28
7F：→ tsubasawolfy:可以离心看看 06/28 21:28
8F：→ tsubasawolfy:特殊离心机是cytocentrifuge离1200g 5-10min 06/28 21:30
9F：→ tsubasawolfy:6.24.48.96well的plate好一点的离心机都有支援 06/28 21:31
10F：→ LIAR:请问是哪个步骤离心？ 06/28 21:35
11F：推 tsubasawolfy:fix之前 06/28 22:24
12F：→ LIAR:可是我固定前有看显微镜，那时还是贴的啊，这样离心还有用吗? 06/28 22:28
13F：推 supray:操作时well会乾掉吗? PBS吸走要马上补 06/30 22:37
14F：→ supray:乾掉了 盐析出 细胞就飘了 06/30 22:38
15F：→ supray:正常 4% paraformaldehyde fix 5 min 就 OK了 06/30 22:40
16F：推 REIDO:请问t大，1200g会不会太大啊？ 07/04 12:30
17F：→ LIAR:我用过离心了，虽然刚离完细胞有点不太一样，但blocking时看 07/05 22:51
18F：→ LIAR:就OK了，还有大部分留着，感谢各位的帮忙。 07/05 22:52