作者pearls (越自由越寂寞)
看板Biotech
標題[請教] 抽核蛋白跑western blot
時間Sat Jun 27 01:31:49 2009
根據大家的回答
已經抽核蛋白來跑western blot
但今天壓片訊號很弱
不是抗體的問體
因為以lysis buffer收的sample相當亮
我loading的量約36ug~43ug的protein
但是一次抽到的量也才50ug左右
想請問有抽核蛋白去跑western的人
大約loading多少?
核蛋白壓片會比較難壓嗎?
以往loading 40ug以上就亮到要迅速感光了
但這次背景很深才有明顯的band
天啊~~data再補不完口試也掛了啦>.<
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.136.197.6
1F：→ wenhaoshen:你收好細胞核fraction,用SDS SAMPLE BUFFER去完整破核 06/27 01:52
我有加sample buffer一起煮
好像是細胞掛了就壓不到我要的protein的樣子
時間點不對就掰了
另外，請問大家是用哪一家的kit呢?
目前用BioVision，但是收的過程要一個小時半才完成
想知道有沒有人是用別家的可以交換一下情報嗎~~ 感謝~~
2F：→ kirby0415:你有壓positive control嗎?會不會很難壓? 06/27 09:15
lab不是做這方面，沒有買p+，要壓五分鐘才看得見，我load 40ug左右，我覺得還好
至少壓得出來，只是抽到的量只夠跑一次就很頭痛>.<
3F：推 tsubasawolfy:不會難壓...像二樓說的弄個positive就知道 核外的也 06/27 09:25
4F：→ tsubasawolfy:以順便壓positive看看有沒有抽好 我們是用PARP當+ 06/27 09:26
to t同學，我是壓NFkB，核外應該一定會有吧??這要怎麼看有沒有抽好咧?
※ 編輯: pearls 來自: 122.116.113.223 (06/27 14:46)
5F：→ wenhaoshen:指標 核內就看C-JUN,質就看TUBULIN actin,應該做得出來 06/27 20:59
6F：推 cecik:NFkB我核用10ug，質用20ug就蠻夠的，Ab是聖誕老人牌 06/29 21:59
7F：推 cecik:我們還是用土法，萃核要O/N，NFkB應該不會難probe 06/29 22:22