作者pearls (越自由越寂寞)
看板Biotech
标题[请教] 抽核蛋白跑western blot
时间Sat Jun 27 01:31:49 2009
根据大家的回答
已经抽核蛋白来跑western blot
但今天压片讯号很弱
不是抗体的问体
因为以lysis buffer收的sample相当亮
我loading的量约36ug~43ug的protein
但是一次抽到的量也才50ug左右
想请问有抽核蛋白去跑western的人
大约loading多少?
核蛋白压片会比较难压吗?
以往loading 40ug以上就亮到要迅速感光了
但这次背景很深才有明显的band
天啊~~data再补不完口试也挂了啦>.<
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.136.197.6
1F：→ wenhaoshen:你收好细胞核fraction,用SDS SAMPLE BUFFER去完整破核 06/27 01:52
我有加sample buffer一起煮
好像是细胞挂了就压不到我要的protein的样子
时间点不对就掰了
另外，请问大家是用哪一家的kit呢?
目前用BioVision，但是收的过程要一个小时半才完成
想知道有没有人是用别家的可以交换一下情报吗~~ 感谢~~
2F：→ kirby0415:你有压positive control吗?会不会很难压? 06/27 09:15
lab不是做这方面，没有买p+，要压五分钟才看得见，我load 40ug左右，我觉得还好
至少压得出来，只是抽到的量只够跑一次就很头痛>.<
3F：推 tsubasawolfy:不会难压...像二楼说的弄个positive就知道 核外的也 06/27 09:25
4F：→ tsubasawolfy:以顺便压positive看看有没有抽好 我们是用PARP当+ 06/27 09:26
to t同学，我是压NFkB，核外应该一定会有吧??这要怎麽看有没有抽好咧?
※ 编辑: pearls 来自: 122.116.113.223 (06/27 14:46)
5F：→ wenhaoshen:指标 核内就看C-JUN,质就看TUBULIN actin,应该做得出来 06/27 20:59
6F：推 cecik:NFkB我核用10ug，质用20ug就蛮够的，Ab是圣诞老人牌 06/29 21:59
7F：推 cecik:我们还是用土法，萃核要O/N，NFkB应该不会难probe 06/29 22:22