作者teddybear209 (慧慧林)
看板Biotech
標題[求救] 有人跑過超大分子量的WB嗎?
時間Sat Jun 27 00:01:46 2009
請問如果要跑350kDa的分子量
該怎用何種條件
因為
現在應該沒有如此大分子的marker吧
要怎嚜比對
是否是要跑大片膠
然後用 7%的gel呢?
有人有做過類似的實驗嗎??
可以提供一下嗎
真是束手無策
謝
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◆ From: 114.38.224.104
1F：推 ROKEE:先gel filtration完再跑?@_@ 06/27 00:05
2F：→ teddybear209:可以提供清楚一點點嗎?謝謝 06/27 00:12
3F：推 blence:我跑460kda,370kda的直接用7% mini-gel即可,不過marker是很 06/27 00:46
4F：→ blence:大問題,市面上看過最大是300kda而已 06/27 00:46
5F：→ blence:不過paper常看到的濃度是4.5%~7%之間,跟實驗目的有關 06/27 00:49
6F：推 tsubasawolfy:350...BRCA嘛XD? 06/27 00:49
7F：推 tsubasawolfy:不對 這東西比較像ATM... 06/27 00:55
8F：→ tsubasawolfy:條件的話跑膠通常不是問題 因為%低就會下來 不過低於 06/27 00:57
9F：→ tsubasawolfy:4%就不太會凝了 比較會有問題的是transfer buffer 06/27 00:58
10F：→ tsubasawolfy:自己配的可能要去找轉高kD的配方 (我自己試過好幾種 06/27 00:59
11F：→ tsubasawolfy:都沒用 最後只好放大絕用commercial..一次就成功) 06/27 01:00
12F：→ blence:一般的Tris-Glycine+10~20%MeOH,Volt不要太高,像是60V/4h或 06/27 02:38
13F：→ blence:20~30V,o/n都很ok,如果用Amp也差不多,會做不順還是要慎選Ab 06/27 02:44
14F：→ tsubasawolfy:Tris-Glycine+20%MeOH是標準buffer..不過用過100V/5h 06/27 09:27
15F：→ tsubasawolfy:還是一樣空蕩蕩 加了微量SDS也是... 06/27 09:29
16F：推 bluecsky:跑大分子的transfer不是要降低MeOH 提高一些SDS嗎?? 06/27 13:14
17F：→ teddybear209:我就是要跑AMP,用6%膠跑可以嗎? 一定要大膠嗎? 06/28 21:02
18F：推 ng0529:幹麻不用~agarose跑 07/01 18:32
19F：→ ng0529:我家550KDA用0.5趴agarose~~~~膠很脆弱~ 07/01 18:35