作者teddybear209 (慧慧林)
看板Biotech
标题[求救] 有人跑过超大分子量的WB吗?
时间Sat Jun 27 00:01:46 2009
请问如果要跑350kDa的分子量
该怎用何种条件
因为
现在应该没有如此大分子的marker吧
要怎嚜比对
是否是要跑大片胶
然後用 7%的gel呢?
有人有做过类似的实验吗??
可以提供一下吗
真是束手无策
谢
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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◆ From: 114.38.224.104
1F：推 ROKEE:先gel filtration完再跑?@_@ 06/27 00:05
2F：→ teddybear209:可以提供清楚一点点吗?谢谢 06/27 00:12
3F：推 blence:我跑460kda,370kda的直接用7% mini-gel即可,不过marker是很 06/27 00:46
4F：→ blence:大问题,市面上看过最大是300kda而已 06/27 00:46
5F：→ blence:不过paper常看到的浓度是4.5%~7%之间,跟实验目的有关 06/27 00:49
6F：推 tsubasawolfy:350...BRCA嘛XD? 06/27 00:49
7F：推 tsubasawolfy:不对 这东西比较像ATM... 06/27 00:55
8F：→ tsubasawolfy:条件的话跑胶通常不是问题 因为%低就会下来 不过低於 06/27 00:57
9F：→ tsubasawolfy:4%就不太会凝了 比较会有问题的是transfer buffer 06/27 00:58
10F：→ tsubasawolfy:自己配的可能要去找转高kD的配方 (我自己试过好几种 06/27 00:59
11F：→ tsubasawolfy:都没用 最後只好放大绝用commercial..一次就成功) 06/27 01:00
12F：→ blence:一般的Tris-Glycine+10~20%MeOH,Volt不要太高,像是60V/4h或 06/27 02:38
13F：→ blence:20~30V,o/n都很ok,如果用Amp也差不多,会做不顺还是要慎选Ab 06/27 02:44
14F：→ tsubasawolfy:Tris-Glycine+20%MeOH是标准buffer..不过用过100V/5h 06/27 09:27
15F：→ tsubasawolfy:还是一样空荡荡 加了微量SDS也是... 06/27 09:29
16F：推 bluecsky:跑大分子的transfer不是要降低MeOH 提高一些SDS吗?? 06/27 13:14
17F：→ teddybear209:我就是要跑AMP,用6%胶跑可以吗? 一定要大胶吗? 06/28 21:02
18F：推 ng0529:干麻不用~agarose跑 07/01 18:32
19F：→ ng0529:我家550KDA用0.5趴agarose~~~~胶很脆弱~ 07/01 18:35