作者lenti (啄木鳥)
看板Biotech
標題Re: [徵求] Stripping Buffer配方
時間Wed Jun 24 02:21:42 2009
抗原抗體complex要解離取決於兩個因素:
一是抗體抗原間的親和力.
二是環境因素. 環境中的電解質, 溫度, 離子強度.
因此, 要使已結和的抗原抗體complex解離, 我們會用不同的stripping buufer
來製造解離的環境.
下列 stripping buffer I, 就是原Po提到的需要加熱的方法,
增加分子間熱動能, 使已結合的complex分離.
他的缺點除了臭之外, 由於溫度變化易使蛋白變性.
Stripping Buffer I
Amount Final Conc.
Tris 3.1 ml (1M stock) 62.5 mM
SDS 1 g 2%
beta-mercaptoethanol 0.34 ml 100 mM
Dissove SDS in 40 ml water, add the Tris, adjust PH to 6.8, add
beta-mercaptoethanol, and then dilute to 50 ml with water.
第二種方法, 就是原po要的不用加熱的方法, 也是commercial常用的配方.
改變環境中的PH和離子強度促進Ab-Ag complex的解離.
也就是在純化Antibody IgG 技術中用的 elution buffer.
配方很簡單, 如下:
(SDS, Tween-20 不加也可以,但重點在以HCl調PH到2.0~2.2)
Stripping Buffer II
Amount Final Conc.
Glycine 1.5 g 0.4 M
SDS 0.1 g 0.2%
Tween 20 1 ml 2%
Dissove Glycine and SDS in 40 ml water, adjust PH to 2.2, add Tween-20, and
then dilute to 50 ml with water.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.31.132.76
1F：推 ranilla:強鹼可以嗎？ 06/24 07:09
2F：推 loham:正需要 推 不喜歡2ME的配方 換個方法 嘿嘿 06/24 13:56
3F：推 gamer123:有建議的反應時間嗎?...謝謝 06/24 17:46
4F：推 imbi:謝啄木鳥大大詳盡解說與建議，受教了 06/26 01:00
5F：→ lenti:反應時間,15~30分鐘, 最短我試過5分鐘, signal就消失了. 06/26 02:33
6F：→ lenti:但如果第一次的訊號較強,確實會有strip不完全的情形. 06/26 02:37
7F：→ lenti:0.2N NaOH我沒試過,如果current protocol有,理論上也可行. 06/26 02:39
8F：推 HXZ:兩個都用過..比較喜歡用第一種...不過時間溫度要控制好 08/03 14:39