作者lenti (啄木鸟)
看板Biotech
标题Re: [徵求] Stripping Buffer配方
时间Wed Jun 24 02:21:42 2009
抗原抗体complex要解离取决於两个因素:
一是抗体抗原间的亲和力.
二是环境因素. 环境中的电解质, 温度, 离子强度.
因此, 要使已结和的抗原抗体complex解离, 我们会用不同的stripping buufer
来制造解离的环境.
下列 stripping buffer I, 就是原Po提到的需要加热的方法,
增加分子间热动能, 使已结合的complex分离.
他的缺点除了臭之外, 由於温度变化易使蛋白变性.
Stripping Buffer I
Amount Final Conc.
Tris 3.1 ml (1M stock) 62.5 mM
SDS 1 g 2%
beta-mercaptoethanol 0.34 ml 100 mM
Dissove SDS in 40 ml water, add the Tris, adjust PH to 6.8, add
beta-mercaptoethanol, and then dilute to 50 ml with water.
第二种方法, 就是原po要的不用加热的方法, 也是commercial常用的配方.
改变环境中的PH和离子强度促进Ab-Ag complex的解离.
也就是在纯化Antibody IgG 技术中用的 elution buffer.
配方很简单, 如下:
(SDS, Tween-20 不加也可以,但重点在以HCl调PH到2.0~2.2)
Stripping Buffer II
Amount Final Conc.
Glycine 1.5 g 0.4 M
SDS 0.1 g 0.2%
Tween 20 1 ml 2%
Dissove Glycine and SDS in 40 ml water, adjust PH to 2.2, add Tween-20, and
then dilute to 50 ml with water.
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◆ From: 61.31.132.76
1F：推 ranilla:强硷可以吗？ 06/24 07:09
2F：推 loham:正需要 推 不喜欢2ME的配方 换个方法 嘿嘿 06/24 13:56
3F：推 gamer123:有建议的反应时间吗?...谢谢 06/24 17:46
4F：推 imbi:谢啄木鸟大大详尽解说与建议，受教了 06/26 01:00
5F：→ lenti:反应时间,15~30分钟, 最短我试过5分钟, signal就消失了. 06/26 02:33
6F：→ lenti:但如果第一次的讯号较强,确实会有strip不完全的情形. 06/26 02:37
7F：→ lenti:0.2N NaOH我没试过,如果current protocol有,理论上也可行. 06/26 02:39
8F：推 HXZ:两个都用过..比较喜欢用第一种...不过时间温度要控制好 08/03 14:39