作者olpo (唸著倒在正你)
看板Biotech
標題[求救] Nickel 變褐色
時間Mon Jun 22 18:15:14 2009
今天在用 Ni-NTA column 做純化時
Buffer的DTT濃度太高 有5mM 結果原本藍色的nickel 整個還原變褐色的
現在整個resin都是褐色的 用EDTA沒用抓不下來都還是維持褐色 用水跟酒精也沒用
用弱氧化劑去洗也是一樣 誰能教我怎辦 實驗室之前沒這樣過 老師也出國
麻煩有經驗的高手能幫我解答一下
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◆ From: 140.120.202.79
1F：推 littlelizard:查一下QUIAGEN或pharmacia的protocol 記得有提到 06/23 01:36
2F：推 wensing:請問開始純化之前，是否有用Ni+2溶液再生resin的動作？ 06/23 04:05
3F：推 weisheng0518:說明書建議不要加 DTT, 用 b-ME 最高加到 20 mM 06/23 07:35
4F：→ weisheng0518:不過我用到 5 mM 還是會又淡淡的褐色就是了 06/23 07:36
5F：推 weisheng0518:你用 DTT 那種 strong reducing agent, Ni 都被 06/23 07:38
6F：→ weisheng0518:reduced 了，沒辦法 bind protein 的.... 06/23 07:39
7F：推 missal:用1M NaOH 之後再用水洗 試試看? 06/23 09:52
8F：→ olpo:用1M NaOH 洗可以洗掉了 感謝 06/23 12:35