作者olpo (念着倒在正你)
看板Biotech
标题[求救] Nickel 变褐色
时间Mon Jun 22 18:15:14 2009
今天在用 Ni-NTA column 做纯化时
Buffer的DTT浓度太高 有5mM 结果原本蓝色的nickel 整个还原变褐色的
现在整个resin都是褐色的 用EDTA没用抓不下来都还是维持褐色 用水跟酒精也没用
用弱氧化剂去洗也是一样 谁能教我怎办 实验室之前没这样过 老师也出国
麻烦有经验的高手能帮我解答一下
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.79
1F：推 littlelizard:查一下QUIAGEN或pharmacia的protocol 记得有提到 06/23 01:36
2F：推 wensing:请问开始纯化之前，是否有用Ni+2溶液再生resin的动作？ 06/23 04:05
3F：推 weisheng0518:说明书建议不要加 DTT, 用 b-ME 最高加到 20 mM 06/23 07:35
4F：→ weisheng0518:不过我用到 5 mM 还是会又淡淡的褐色就是了 06/23 07:36
5F：推 weisheng0518:你用 DTT 那种 strong reducing agent, Ni 都被 06/23 07:38
6F：→ weisheng0518:reduced 了，没办法 bind protein 的.... 06/23 07:39
7F：推 missal:用1M NaOH 之後再用水洗 试试看? 06/23 09:52
8F：→ olpo:用1M NaOH 洗可以洗掉了 感谢 06/23 12:35