作者kutoushinji (所有人都跟我犯沖嗎?)
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標題[求救] SDS-PAGE的膠不會凝
時間Sat Jun 20 21:14:48 2009
我一直都在跑SDS，之前做的膠都會凝固
可是最近做的上層膠都不太凝固
下層膠凝結的速度也沒有很快
可是上層膠不是不會凝，是倒掉之後還是有上層膠存在，但是沒有完全凝固
而是有點稠稠的
我10% APS都是當天現泡的，應該沒有問題
膠的配方：
running gel(10%) stacking del(4%)
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DDH2O 4.82ml 3.2ml
1.5M Tris(ph8.8) 2.5ml 1250μl(0.5M Tris(ph6.8))
40% acrydmide/bis 2.5ml 500μl
10% SDS 100μl 50μl
10% APS 50μl 25μl
TEMED 15μl 7.5μl
請大家告訴我，我要更改哪一個的量呢?
我現在在測試提高APS跟TEMED的量，下層膠凝固良好，上層膠正在測試中
等做完我會跟大家報告結果
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.110
1F：→ kutoushinji:對了,有一說冰過的膠跑起來比較漂亮,那要冰多久啊? 06/20 21:21
2F：推 takumatw:APS太少,我下膠APS用150ul 06/20 21:28
3F：→ takumatw:我通常膠做好會放在夾鏈袋裡,在裡面放一點ddih2o 06/20 21:29
4F：→ takumatw:不會當天做當天用,都至少放4度Covernight 06/20 21:30
5F：推 beowulfo:通常是APS問題.借別家的來配看看 06/20 22:01
6F：推 pettra:APS加多一點,10ml膠可加到100ul 06/20 22:51
7F：→ kutoushinji:我剛剛試著將APS跟TEMED變2倍,結果凝了耶! 06/20 23:09
8F：推 turtle24:放37度放個半小時凝比較快 06/20 23:13
9F：推 blence:APS會潮掉,拿壞掉的粉來配是沒效的,而且天天開瓶現泡也不好 06/20 23:35
10F：推 Riapsed:我會把一定量的APS秤好放入microtube用parafilm封好,要用 06/21 00:41
11F：→ Riapsed:時直接加dH2O即可;一次秤20管,也不怕潮掉,以上供參考~ 06/21 00:42
12F：推 alaric:我們都把APS stock分裝數管放在-20度C存放, 要用再回溫. 06/21 01:40
13F：→ kutoushinji:所以跟TEMED的量沒有關係囉! 06/21 02:28
14F：→ kutoushinji:我聽說APS配成stock不好耶!好像效果會降低 06/21 02:29
15F：→ kutoushinji:我實驗室的APS有變成塊狀那就是潮掉的跡象嗎? 06/21 02:31
16F：推 sheepfeather:自由基是APS提供的 TEMED只是加快反應 06/21 06:05
17F：→ sheepfeather:APS加多一點應該就沒關係了 TEMED多點只是凝比較快 06/21 06:05
18F：推 pooldodo:APS要放防潮箱比較好 真的差很多 06/21 07:47
19F：推 iiidns:結塊就是受潮了 失去很大的效用 請買新的 06/21 11:56
20F：推 unrealfox:一樓 我們家的SDSPAGE冰過會散掉耶 跑起來整片糊掉 囧 06/21 14:33
21F：推 ranilla:我的不會，4度C放三個禮拜，還是一樣漂亮 06/21 14:57
22F：推 blence:很多lab的APS都不知已潮掉,所以用太嚴謹的方式保存使用,配 06/21 15:02
23F：→ blence:過新的就知道,4度C放幾個月,效果還是超好 06/21 15:03
24F：推 m82:APS太少+1 還有APS我是都用現泡的 效果不錯 06/21 17:50
25F：推 captdavince:想請問..如果是分裝冰起來...放冰箱不會比較容易受潮 06/21 19:12
26F：→ captdavince:嗎?..還是說大家都會用parafilm封口? 06/21 19:12
27F：推 bluecsky:直接整罐配好再分裝去-20凍起來不就好 ? 可以拿一些 06/21 19:52
28F：→ bluecsky:去4度放者 我們lab都這樣做 APS還沒出過問題 06/21 19:53
29F：推 dankai:鮮配比較好~實驗室是公共空間每個人習觀不一樣!不建議整罐 06/21 20:29
30F：→ dankai:一次配完~沒配完的我們會放在防潮箱!配完當下沒用完的放-20 06/21 20:30
31F：→ dankai: 慣 @@ 06/21 20:31
32F：推 xeiko:我之前APS都是TEMED的十倍量 要調整凝結速度就兩個一起改 06/22 00:12
33F：推 ng0529:APS配好分裝冰-20~一個月用也沒問題 06/22 00:42
34F：推 isdorothy:TAMED需要加那麼多嗎＠＠我們家都只加3ul耶 06/23 01:55
35F：推 tchan:下膠APS加太少(100ul)，TEMED量太多(5ul)！ 06/24 12:43
36F：→ tchan:上膠的話以6ml計算的話，APS 60ul, TEMED 6ul這樣會很好凝 06/24 12:45
37F：→ tchan:推某S大，APS是提供架橋(凝固)，TEMED是催化劑(多也沒用) 06/24 12:47