作者kutoushinji (所有人都跟我犯冲吗?)
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标题[求救] SDS-PAGE的胶不会凝
时间Sat Jun 20 21:14:48 2009
我一直都在跑SDS，之前做的胶都会凝固
可是最近做的上层胶都不太凝固
下层胶凝结的速度也没有很快
可是上层胶不是不会凝，是倒掉之後还是有上层胶存在，但是没有完全凝固
而是有点稠稠的
我10% APS都是当天现泡的，应该没有问题
胶的配方：
running gel(10%) stacking del(4%)
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DDH2O 4.82ml 3.2ml
1.5M Tris(ph8.8) 2.5ml 1250μl(0.5M Tris(ph6.8))
40% acrydmide/bis 2.5ml 500μl
10% SDS 100μl 50μl
10% APS 50μl 25μl
TEMED 15μl 7.5μl
请大家告诉我，我要更改哪一个的量呢?
我现在在测试提高APS跟TEMED的量，下层胶凝固良好，上层胶正在测试中
等做完我会跟大家报告结果
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.110
1F：→ kutoushinji:对了,有一说冰过的胶跑起来比较漂亮,那要冰多久啊? 06/20 21:21
2F：推 takumatw:APS太少,我下胶APS用150ul 06/20 21:28
3F：→ takumatw:我通常胶做好会放在夹链袋里,在里面放一点ddih2o 06/20 21:29
4F：→ takumatw:不会当天做当天用,都至少放4度Covernight 06/20 21:30
5F：推 beowulfo:通常是APS问题.借别家的来配看看 06/20 22:01
6F：推 pettra:APS加多一点,10ml胶可加到100ul 06/20 22:51
7F：→ kutoushinji:我刚刚试着将APS跟TEMED变2倍,结果凝了耶! 06/20 23:09
8F：推 turtle24:放37度放个半小时凝比较快 06/20 23:13
9F：推 blence:APS会潮掉,拿坏掉的粉来配是没效的,而且天天开瓶现泡也不好 06/20 23:35
10F：推 Riapsed:我会把一定量的APS秤好放入microtube用parafilm封好,要用 06/21 00:41
11F：→ Riapsed:时直接加dH2O即可;一次秤20管,也不怕潮掉,以上供参考~ 06/21 00:42
12F：推 alaric:我们都把APS stock分装数管放在-20度C存放, 要用再回温. 06/21 01:40
13F：→ kutoushinji:所以跟TEMED的量没有关系罗! 06/21 02:28
14F：→ kutoushinji:我听说APS配成stock不好耶!好像效果会降低 06/21 02:29
15F：→ kutoushinji:我实验室的APS有变成块状那就是潮掉的迹象吗? 06/21 02:31
16F：推 sheepfeather:自由基是APS提供的 TEMED只是加快反应 06/21 06:05
17F：→ sheepfeather:APS加多一点应该就没关系了 TEMED多点只是凝比较快 06/21 06:05
18F：推 pooldodo:APS要放防潮箱比较好 真的差很多 06/21 07:47
19F：推 iiidns:结块就是受潮了 失去很大的效用 请买新的 06/21 11:56
20F：推 unrealfox:一楼 我们家的SDSPAGE冰过会散掉耶 跑起来整片糊掉 囧 06/21 14:33
21F：推 ranilla:我的不会，4度C放三个礼拜，还是一样漂亮 06/21 14:57
22F：推 blence:很多lab的APS都不知已潮掉,所以用太严谨的方式保存使用,配 06/21 15:02
23F：→ blence:过新的就知道,4度C放几个月,效果还是超好 06/21 15:03
24F：推 m82:APS太少+1 还有APS我是都用现泡的 效果不错 06/21 17:50
25F：推 captdavince:想请问..如果是分装冰起来...放冰箱不会比较容易受潮 06/21 19:12
26F：→ captdavince:吗?..还是说大家都会用parafilm封口? 06/21 19:12
27F：推 bluecsky:直接整罐配好再分装去-20冻起来不就好 ? 可以拿一些 06/21 19:52
28F：→ bluecsky:去4度放者 我们lab都这样做 APS还没出过问题 06/21 19:53
29F：推 dankai:鲜配比较好~实验室是公共空间每个人习观不一样!不建议整罐 06/21 20:29
30F：→ dankai:一次配完~没配完的我们会放在防潮箱!配完当下没用完的放-20 06/21 20:30
31F：→ dankai: 惯 @@ 06/21 20:31
32F：推 xeiko:我之前APS都是TEMED的十倍量 要调整凝结速度就两个一起改 06/22 00:12
33F：推 ng0529:APS配好分装冰-20~一个月用也没问题 06/22 00:42
34F：推 isdorothy:TAMED需要加那麽多吗＠＠我们家都只加3ul耶 06/23 01:55
35F：推 tchan:下胶APS加太少(100ul)，TEMED量太多(5ul)！ 06/24 12:43
36F：→ tchan:上胶的话以6ml计算的话，APS 60ul, TEMED 6ul这样会很好凝 06/24 12:45
37F：→ tchan:推某S大，APS是提供架桥(凝固)，TEMED是催化剂(多也没用) 06/24 12:47