作者swallow0912 (你到底要什麼?)
看板Biotech
標題[求救] 壓片問題
時間Tue Jun 16 22:10:46 2009
我最近在作壓片 實驗原理大約是 將有末端標記biotein的DNA序列
跑膠 20% polyacamide/8M urea gel transfer到膜上
然後用kit的方法strepavidin-HRT去冷光呈色
壓片在膜跟底片之間有隔一層保鮮膜 壓片時間約20分鐘
之後顯影 定影 每次壓出來的片子都超黑 黑到一種誇張的境界
換過新的定影顯影液 也換了新的底片 我是用白片
我不知道問題出在哪裡 每次做都是壓出來很黑很黑的片
要放在日光燈下才能看到我的band 我想請問 有可能是我哪步出問題?
顯影液配錯? 我是依照配方稀釋的 我配500c.c 我用109c.c的顯定影原液加水稀釋到500c.c
顯影時 大約20秒 看到片子變黑我就沖水之後泡定影液了
不過每次出來的片子是真的很黑 黑到幾乎不透光 實驗室有做過的人我有請教過
他說他也不知道 他沒壓過這麼黑的片子過 也從頭到尾帶我做過依次
請問板上有經驗的各位大大 有可能是發生在哪個步驟問題 我每次壓出的片都超級黑
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◆ From: 140.109.91.184
1F：推 yuching23:跟我之前好像~~整片membrance壓出來都是黑的~ 06/16 22:50
2F：→ swallow0912:對呀 每壓一片 我的心也跟著黑了= = 06/17 00:01
3F：推 apple76427:會不會是washing時的問題.. 06/17 01:55
4F：推 boblu:拿一張沒壓過的片子直接去沖洗 洗出來還是黑的 就是沖洗問題 06/17 05:17
5F：推 toocool5941:加solution A and B時，關燈下有發光嗎? 06/17 06:51
6F：推 boblu:到底是片子整張黑 還是壓 membrane 的地方黑？ 06/17 20:58
7F：→ swallow0912:整張黑 band的地方特別黑 關燈下有發光 06/17 21:06
8F：推 toocool5941:如果有發光，縮短壓片時間。光很強的話甚至5秒就夠了 06/18 00:24
9F：推 allisa:會不會是壓太久 泡顯影又太久 通常band很強的 壓個幾秒 06/18 09:22
10F：→ allisa:就趕緊丟到顯影液涮幾下-->水-->定影 不然整張會很黑 06/18 09:23
11F：→ allisa:看到band出來就要趕緊用水洗然後定影了吧 不然黑很快@@ 06/18 09:25
12F：→ allisa:經驗談啦 不知道原PO的情形到底是怎麼樣@@ 06/18 09:25
13F：推 su9602:這樣壓1秒就好了,我們家很多東西都壓1秒就ok了... 06/19 12:55