作者swallow0912 (你到底要什麽?)
看板Biotech
标题[求救] 压片问题
时间Tue Jun 16 22:10:46 2009
我最近在作压片 实验原理大约是 将有末端标记biotein的DNA序列
跑胶 20% polyacamide/8M urea gel transfer到膜上
然後用kit的方法strepavidin-HRT去冷光呈色
压片在膜跟底片之间有隔一层保鲜膜 压片时间约20分钟
之後显影 定影 每次压出来的片子都超黑 黑到一种夸张的境界
换过新的定影显影液 也换了新的底片 我是用白片
我不知道问题出在哪里 每次做都是压出来很黑很黑的片
要放在日光灯下才能看到我的band 我想请问 有可能是我哪步出问题?
显影液配错? 我是依照配方稀释的 我配500c.c 我用109c.c的显定影原液加水稀释到500c.c
显影时 大约20秒 看到片子变黑我就冲水之後泡定影液了
不过每次出来的片子是真的很黑 黑到几乎不透光 实验室有做过的人我有请教过
他说他也不知道 他没压过这麽黑的片子过 也从头到尾带我做过依次
请问板上有经验的各位大大 有可能是发生在哪个步骤问题 我每次压出的片都超级黑
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.91.184
1F：推 yuching23:跟我之前好像~~整片membrance压出来都是黑的~ 06/16 22:50
2F：→ swallow0912:对呀 每压一片 我的心也跟着黑了= = 06/17 00:01
3F：推 apple76427:会不会是washing时的问题.. 06/17 01:55
4F：推 boblu:拿一张没压过的片子直接去冲洗 洗出来还是黑的 就是冲洗问题 06/17 05:17
5F：推 toocool5941:加solution A and B时，关灯下有发光吗? 06/17 06:51
6F：推 boblu:到底是片子整张黑 还是压 membrane 的地方黑？ 06/17 20:58
7F：→ swallow0912:整张黑 band的地方特别黑 关灯下有发光 06/17 21:06
8F：推 toocool5941:如果有发光，缩短压片时间。光很强的话甚至5秒就够了 06/18 00:24
9F：推 allisa:会不会是压太久 泡显影又太久 通常band很强的 压个几秒 06/18 09:22
10F：→ allisa:就赶紧丢到显影液涮几下-->水-->定影 不然整张会很黑 06/18 09:23
11F：→ allisa:看到band出来就要赶紧用水洗然後定影了吧 不然黑很快@@ 06/18 09:25
12F：→ allisa:经验谈啦 不知道原PO的情形到底是怎麽样@@ 06/18 09:25
13F：推 su9602:这样压1秒就好了,我们家很多东西都压1秒就ok了... 06/19 12:55