作者yangkoumi (用力活著)
看板Biotech
標題[討論] TCA蛋白質沉澱
時間Thu Jun 11 21:50:03 2009
想請問一下關於TCA沉澱蛋白質的方法~
先說我的處理方式:
1.將蛋白萃取液加入含有10% TCA的丙酮溶液中
2.將混合液放入-20度 overnight
3.隔天取出離心30分鐘(10000 xg)，倒掉上清液
4.取出pellet置入tube中並加入丙酮1mL，並離心10分鐘
5.倒除上清的丙酮，再加入丙酮離心(repeat數次)
6.加入先前的萃取buffer去溶沉澱
現在發現pellet無法溶解在buffer之中~@@
我知道做二維的時候會加rehydration buffer去溶pellet
但是我現在是要跑一維，那該怎麼做呢?
是我的操作方法有錯嗎?
煩請知道的人解答一下~
謝謝~!
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◆ From: 140.112.88.68
1F：推 CErline:沒有錯，TCA/acetone本來就超級難溶，我後來多加urea和DTT 06/11 22:33
2F：→ CErline:也沒用，就是一團在那裡 06/11 22:33
3F：→ CErline:後來放棄，只用acetone沈澱，不知其他人有無新方法 06/11 22:35
4F：推 dankai:我有另外再加thiourea ~ 還有pellet都沒辦法溶的話我認為雜 06/11 23:26
5F：→ dankai:質可能性很高~我都會重抽 06/11 23:27
6F：推 muchmoa:煮了還是不溶嘛？用rehydration buffer也是可以跑1D啊 06/12 00:19
7F：推 missoul:我沉澱有時會包含DTT-數次丙酮-95%絕對酒精兩次後乾燥 06/13 02:11
8F：→ missoul:好像過程有DTT效果都不錯 我是以CHAPS/urea/thiourea溶 06/13 02:12