作者yangkoumi (用力活着)
看板Biotech
标题[讨论] TCA蛋白质沉淀
时间Thu Jun 11 21:50:03 2009
想请问一下关於TCA沉淀蛋白质的方法~
先说我的处理方式:
1.将蛋白萃取液加入含有10% TCA的丙酮溶液中
2.将混合液放入-20度 overnight
3.隔天取出离心30分钟(10000 xg)，倒掉上清液
4.取出pellet置入tube中并加入丙酮1mL，并离心10分钟
5.倒除上清的丙酮，再加入丙酮离心(repeat数次)
6.加入先前的萃取buffer去溶沉淀
现在发现pellet无法溶解在buffer之中~@@
我知道做二维的时候会加rehydration buffer去溶pellet
但是我现在是要跑一维，那该怎麽做呢?
是我的操作方法有错吗?
烦请知道的人解答一下~
谢谢~!
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◆ From: 140.112.88.68
1F：推 CErline:没有错，TCA/acetone本来就超级难溶，我後来多加urea和DTT 06/11 22:33
2F：→ CErline:也没用，就是一团在那里 06/11 22:33
3F：→ CErline:後来放弃，只用acetone沈淀，不知其他人有无新方法 06/11 22:35
4F：推 dankai:我有另外再加thiourea ~ 还有pellet都没办法溶的话我认为杂 06/11 23:26
5F：→ dankai:质可能性很高~我都会重抽 06/11 23:27
6F：推 muchmoa:煮了还是不溶嘛？用rehydration buffer也是可以跑1D啊 06/12 00:19
7F：推 missoul:我沉淀有时会包含DTT-数次丙酮-95%绝对酒精两次後乾燥 06/13 02:11
8F：→ missoul:好像过程有DTT效果都不错 我是以CHAPS/urea/thiourea溶 06/13 02:12