作者sp3 (sp3)
看板Biotech
標題[求救] 關於破菌與蛋白質純化
時間Wed Jun 10 23:50:32 2009
請問各位實驗魔人大大兩個問題
第一個是以lysis buffer破菌的話 怎麼知道它有破完全呢?
是不是看有沒有DNA RNA流出後所造成的黏稠現象來判斷?
還是有別的判斷方法?
第二個問題是 如果目標蛋白質不行被很濃的硫酸銨沉澱下來
那麼該怎麼辦呢?
這樣是不是代表蛋白質親水性太高
那要換成什麼純化方法比較好呀?
麻煩請高人指點 ^^"
感激不盡
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◆ From: 140.112.217.50
※ 編輯: sp3 來自: 140.112.217.50 (06/10 23:52)
1F：推 jsi:推薦使用french press破菌 重複數次破菌後 濃稠度會逐漸降低 06/10 23:57
2F：→ jsi:我使用此法獲得很好的破菌效果 (相較於sonication) 06/10 23:59
3F：推 qumai:菌破掉溶液會比較澄清吧 06/11 10:14
4F：推 wensing:我都是用sonication，破菌前後，顏色有明顯的變化！ 06/11 11:09
5F：→ wensing:有接taq嗎？ 若硫酸銨有將大部份的雜蛋白沉澱下來 06/11 11:11
6F：→ wensing:接下來，可考慮HPLC純化。 06/11 11:12
7F：→ sp3:恩 有加tag 謝謝樓上幾位大大>//////< 06/11 14:45
8F：推 CErline:1.拿一點菌液到顯微鏡下看 2.可試不同沈澱劑，有陽離子型 06/11 22:26
9F：→ CErline:或陰離子型，google一下"膠羽"可能有幫助 06/11 22:28