作者sp3 (sp3)
看板Biotech
标题[求救] 关於破菌与蛋白质纯化
时间Wed Jun 10 23:50:32 2009
请问各位实验魔人大大两个问题
第一个是以lysis buffer破菌的话 怎麽知道它有破完全呢?
是不是看有没有DNA RNA流出後所造成的黏稠现象来判断?
还是有别的判断方法?
第二个问题是 如果目标蛋白质不行被很浓的硫酸铵沉淀下来
那麽该怎麽办呢?
这样是不是代表蛋白质亲水性太高
那要换成什麽纯化方法比较好呀?
麻烦请高人指点 ^^"
感激不尽
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.217.50
※ 编辑: sp3 来自: 140.112.217.50 (06/10 23:52)
1F：推 jsi:推荐使用french press破菌 重复数次破菌後 浓稠度会逐渐降低 06/10 23:57
2F：→ jsi:我使用此法获得很好的破菌效果 (相较於sonication) 06/10 23:59
3F：推 qumai:菌破掉溶液会比较澄清吧 06/11 10:14
4F：推 wensing:我都是用sonication，破菌前後，颜色有明显的变化！ 06/11 11:09
5F：→ wensing:有接taq吗？ 若硫酸铵有将大部份的杂蛋白沉淀下来 06/11 11:11
6F：→ wensing:接下来，可考虑HPLC纯化。 06/11 11:12
7F：→ sp3:恩 有加tag 谢谢楼上几位大大>//////< 06/11 14:45
8F：推 CErline:1.拿一点菌液到显微镜下看 2.可试不同沈淀剂，有阳离子型 06/11 22:26
9F：→ CErline:或阴离子型，google一下"胶羽"可能有帮助 06/11 22:28