作者ftsyice (Matt)
看板Biotech
標題[求救] 關於養菌,抽Mini (>_<) 急~
時間Tue Jun 2 15:28:49 2009
我手殘,將兩種construct的Mini混合了
因為要用酵素切Overnight,確認insert是否有接進去
進度不想再延後一天,於是又重新養菌
想請問一下,通常養菌抽Mini都是12~16小時
我現在三點加了7CC的LB (實驗室都加這麼多),37度搖
希望今晚就能夠再做Mini,好讓我再加酵素切Overnight
不知道今晚9點左右,是否就可以抽了呢?
想請問一下,抽Mini養菌的最短紀錄是如何?
是否有人有此經驗呢?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.47
1F：推 conective:酵素切OVERNIGHT是為什麼？ 覺得六小時好像有點少 06/02 15:58
2F：→ conective:倒不如酵素不要切OVERNIGHT 早上抽完丟下去下午還是可以 06/02 15:58
3F：→ conective:看結果 06/02 15:58
4F：推 tsubasawolfy:check用的1h就夠了 06/02 16:04
5F：→ ftsyice:因為我把兩種mini混合了.. (汗) 06/02 16:09
6F：→ ftsyice:切這麼久,是其中一種要用來做Vectro,想切乾淨一點 06/02 16:10
7F：推 tsubasawolfy:重新transform重養吧....不然後面出錯天知道是哪邊 06/02 16:17
8F：推 yaliu:挑colony養6小時時間有點少，再加上你養7c.c.如果溶氧量不足 06/02 16:37
9F：→ yaliu:長得會很慢....我曾經做過3c.c.養7~8個小時，全部都拿去抽 06/02 16:39
10F：→ yaliu:3c.c.的菌數感覺很多，不過抽出來的質體量卻很少...0rz 06/02 16:40
11F：→ yaliu:建議你養到隔天再抽拉，vector想切乾淨，那就多加點酵素好了 06/02 16:40
12F：→ yaliu:即便製備vector，應該也不需要切隔夜，4hr很足了我覺得 06/02 16:41
13F：推 kaifish:用2YT可以養八小時就好 06/02 17:28
14F：推 jademan:您為什麼要這麼著急呢~ (嘿嘿) 06/02 18:33
15F：推 rebirth:慢慢來 比較快 一步錯 步步錯 06/02 19:36
16F：推 turtle24:第一行+第三行 => 你為什麼這麼著急呢? 06/02 21:27
17F：推 bluecsky:重頭做最穩 不然這東西你也不確定純不純 做到最後發現 06/03 08:18
18F：→ bluecsky:都錯了才從頭的話 不是更浪費時間嗎? 06/03 08:19
19F：→ ftsyice:我昨天兩個都做了(一起進行),養6小時可以離到菌,但mini抽 06/03 20:01
20F：→ ftsyice:了後,mini很少. 感謝你們的建議 06/03 20:02
21F：→ ftsyice:OS:辛苦沒關係,實驗狂做沒關係,但沒有結果真的很讓人懊惱 06/03 20:03
22F：→ ftsyice:ligation失敗,不知是技術還是經驗問題.我想幸運問題吧(嘆) 06/03 20:05
23F：推 sharkzoe:mini抽得低，ligation的效率相對也較低，跟幸運無關啦! 06/05 10:57
24F：→ sharkzoe:重新養7ml隔夜菌液抽mini就好，酵素切3hr就可做Vector了 06/05 10:59
25F：→ sharkzoe:Boss說菌量太濃的話，菌會把plasmid吐掉，Y大可能是這樣 06/05 11:01