作者ftsyice (Matt)
看板Biotech
标题[求救] 关於养菌,抽Mini (>_<) 急~
时间Tue Jun 2 15:28:49 2009
我手残,将两种construct的Mini混合了
因为要用酵素切Overnight,确认insert是否有接进去
进度不想再延後一天,於是又重新养菌
想请问一下,通常养菌抽Mini都是12~16小时
我现在三点加了7CC的LB (实验室都加这麽多),37度摇
希望今晚就能够再做Mini,好让我再加酵素切Overnight
不知道今晚9点左右,是否就可以抽了呢?
想请问一下,抽Mini养菌的最短纪录是如何?
是否有人有此经验呢?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 192.192.93.47
1F：推 conective:酵素切OVERNIGHT是为什麽？ 觉得六小时好像有点少 06/02 15:58
2F：→ conective:倒不如酵素不要切OVERNIGHT 早上抽完丢下去下午还是可以 06/02 15:58
3F：→ conective:看结果 06/02 15:58
4F：推 tsubasawolfy:check用的1h就够了 06/02 16:04
5F：→ ftsyice:因为我把两种mini混合了.. (汗) 06/02 16:09
6F：→ ftsyice:切这麽久,是其中一种要用来做Vectro,想切乾净一点 06/02 16:10
7F：推 tsubasawolfy:重新transform重养吧....不然後面出错天知道是哪边 06/02 16:17
8F：推 yaliu:挑colony养6小时时间有点少，再加上你养7c.c.如果溶氧量不足 06/02 16:37
9F：→ yaliu:长得会很慢....我曾经做过3c.c.养7~8个小时，全部都拿去抽 06/02 16:39
10F：→ yaliu:3c.c.的菌数感觉很多，不过抽出来的质体量却很少...0rz 06/02 16:40
11F：→ yaliu:建议你养到隔天再抽拉，vector想切乾净，那就多加点酵素好了 06/02 16:40
12F：→ yaliu:即便制备vector，应该也不需要切隔夜，4hr很足了我觉得 06/02 16:41
13F：推 kaifish:用2YT可以养八小时就好 06/02 17:28
14F：推 jademan:您为什麽要这麽着急呢~ (嘿嘿) 06/02 18:33
15F：推 rebirth:慢慢来 比较快 一步错 步步错 06/02 19:36
16F：推 turtle24:第一行+第三行 => 你为什麽这麽着急呢? 06/02 21:27
17F：推 bluecsky:重头做最稳 不然这东西你也不确定纯不纯 做到最後发现 06/03 08:18
18F：→ bluecsky:都错了才从头的话 不是更浪费时间吗? 06/03 08:19
19F：→ ftsyice:我昨天两个都做了(一起进行),养6小时可以离到菌,但mini抽 06/03 20:01
20F：→ ftsyice:了後,mini很少. 感谢你们的建议 06/03 20:02
21F：→ ftsyice:OS:辛苦没关系,实验狂做没关系,但没有结果真的很让人懊恼 06/03 20:03
22F：→ ftsyice:ligation失败,不知是技术还是经验问题.我想幸运问题吧(叹) 06/03 20:05
23F：推 sharkzoe:mini抽得低，ligation的效率相对也较低，跟幸运无关啦! 06/05 10:57
24F：→ sharkzoe:重新养7ml隔夜菌液抽mini就好，酵素切3hr就可做Vector了 06/05 10:59
25F：→ sharkzoe:Boss说菌量太浓的话，菌会把plasmid吐掉，Y大可能是这样 06/05 11:01