作者charlielg (chi)
看板Biotech
標題[討論]ligation問題?
時間Thu May 7 22:45:52 2009
最近要把我的insert(約2.9kb)接入expression vector(PMal-C2X,6.6kb)中
,結果在transform之後有長出數十顆single colony,把這接single colony進行
培養並抽plasmid,之後進行double digest,發現有一組切出insert大小很相近,送
定序,定序出來結果進行比對,結果發現比對不到我的insert序列卻比對出cloning
host的序列,想請問是操作過程中有汙染造成的或是有其他原因?希望好心人士給點建議
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.155.210
1F：推 FinAPP:先確認EXPRESSION VECTOR上除了cloning site外有沒有會被RE 05/08 10:59
2F：→ FinAPP:辨識的site 05/08 11:00
3F：推 FinAPP:我猜你是用vector上的primer讀,如果是汙染insert有進去的話 05/08 11:08
4F：→ FinAPP:應該會有兩個訊號 05/08 11:08
5F：→ FinAPP:所以應該是沒clone成功 05/08 11:10